分子克隆技术（也称基因克隆技术）

限制性内切酶切割和连接，制成

细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的

分子片段。主要目的是获得某

片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构

库，一种是基因组文库（

片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。

是一种细菌染色体外小型双链环状结构的

，对细菌的某些代谢活动和

抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是

含有某种生物体全部基历的随机片段的重组

克隆群体，其含有感光趣的基因片段的重组子，可以通

过标记探针与基因库中的重组子杂交等方法而筛选出来，所得到的克隆经过纯化和扩增，可用于进

的研。其主步骤包括：（

）构建基因库迅速的载体；

库包括某特定细胞的全部

隆的文库，不含内含子。

）克隆筛选即探针筛选法；

检测其分泌蛋白质来筛选目的基因；

放射免疫筛选法，查出分泌特异抗原的基因；（

）免疫沉淀法，进行特异基因的筛选。

的碱基序列决定着基因的特性，

是分子生物学重要的基本技术。

无论从基因库中筛选的癌基因或经

法扩增的基因，最终均需进行核酸序列分析，可藉以了解基因的

精细结构，获得其限制性内切酶图谱，分析基因的突变及对功能的影响，帮助人工俣成基因、设计引物，

以及研究肿瘤的分子发病机制等。测序是在高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基础上建立起来的。

然后用专一性化学试剂将

可得到从标记端延伸的片段供测读序列和进行比较。

双脱氧法是采用核苷酸链终止剂，如：

的混合物分成四组进行反应，

这样可得到一组结尾长衙不一、不同专一性核苷酸链终止剂结尾的

片段，经凝胶电泳分离和放射自

核苷酸序列，根据碱基互补原则，可推算出模板