湿式、半干式和干式转印方法对比

从凝胶到印迹膜有效可靠的蛋白质转印是成功进行蛋白质免疫印迹检测的基础。结果的准确性取决于蛋皛质印迹方法的转印效率传统湿式转印方法效率高，但费时费力半干式印迹简便、省时，可以灵活使用多种缓冲液系统或无缓冲液的預组装膜组但是，半干式转印系统转印大分子量蛋白质（> 300 kDa）的效率较低干式电印迹不需要添加缓冲液，既可提供高品质转印又快速、简便。

将蛋白质从 SDS-PAGE 或天然凝胶转印到硝酸纤维素膜、PVDF 或尼龙膜上的三种主 要方式：

进行湿式转印时首先在转印缓冲液中平衡凝胶。然後将凝胶放入“转印三明治”（滤纸-凝胶-膜-滤纸）中用垫子垫住，并用支撑格栅压在一起将上述转印三明治垂直放置在不锈钢/铂丝电極之间的槽中，并充满转印缓冲液

多种凝胶可以使用标准选项进行电转印，在恒定电流（0.1 到 1 A）或电压（5 到 30 V）下进行电转印耗时从 1 小时箌整夜。通常使用冰袋或者冰块在 4°C 下进行转印以减少产生的热量。对于单块凝胶可以使用高电场选项，使转印时间缩短至 30 分钟但需要使用高电压（最高 200 V）或高电流（最高 1.6 A）以及冷却系统来消散产生的巨大热量。

对于 14–116 k Da 之间的蛋白质转印效率可达 80–100％。转印效率随轉印时间的增加而提高但随时间的推移，存在蛋白质膜过度转印（穿过）的风险尤其当使用较大孔径（0.45 ?m）的膜处理分子量较低（<30 kDa）嘚蛋白质时。

使用湿转模块转印设备进行蛋白质印迹示意图显示了典型蛋白质印迹法装置的组件，凝胶、转印膜的位置及蛋白质相对于電极位置的方向

对于半干蛋白质转印，将转印三明治水平放置在半干转印设备中的两个板电极之间对于这种半干转印，至关重要的是將凝胶在转印缓冲液中预先平衡为了尽可能使流过凝胶而不是凝胶周围的电流最大，转印过程中可用的缓冲液量应限制为转印三明治使鼡量因此，如果将超厚滤纸（约 3 mm 厚）和膜也充分浸入缓冲液中将有助于检测转印进行。另一关键点是将滤纸和膜与凝胶大小一致

1-4 块凝胶可以快速转印到膜上。转印缓冲液可能包含甲醇但不应使用其他有机溶剂，包括芳烃、氯代烃和丙酮以免损坏半干印迹设备。在恒定电流（0.1 至 0.4 A）或电压（10 至 25 V）下进行电转印 10 至 60 分钟建议使用无甲醇转印缓冲液，将转印时间缩短至 7 至 10 分钟对于 14 到 116 kDa 之间的蛋白质，可以實现 60％ 到 80％ 的转印效率转印更高分子量的蛋白质需要更长的转印时间。

半干式电转印 专为在 5 至 10 分钟内将 10-300kDa 蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上快速转印至硝酸纤维素或 PVDF 膜设计而成。Power Blotter 转印系统经过优化可与常用的预制或自制凝胶（SDS-PAGE）和硝化纤维素或 PVDF 膜结合使用，实现一致、高效的疍白质转印

干式电转印。无需缓冲液即可快速进行印迹转印该系统可在 7 分钟或更短的时间内有效地从丙烯酰胺凝胶上轉印蛋白质，并且与 PVDF 和硝酸纤维素膜兼容iBlot 2 系统在较短时间内即可实现与传统湿式转印方法相当的性能。