饮用水中大肠杆菌及检测方法

一、乳糖发酵实验（初发酵实验）

：将配制好的培养液分装于每管

个试管，并各放入一个小倒管

的稀释液。取上述稀释液

灭菌生理盐水震荡摇匀，为

接种到乳糖胆盐发酵管中

污染程度可以适当调整稀释的比例）每一稀释度接种三管。

：将试管连同试管架放入培养箱中

產酸溶液会由紫色变为黄色产气发酵管中会有气泡。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气

则报告大肠杆菌群阴性，如有产气管就需要进荇分离培养，即进行伊红美蓝培养基鉴别

二、伊红美蓝培养基鉴别实验（接种实验）

制法：将蛋白胨磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校囸

备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂，冷至

℃加入伊红美蓝溶液，摇

称量：准确称取各成分

溶化：加热熔化，定容

的三角瓶中加上棉塞。将培养皿用报纸包好放入灭菌锅内，

）：灭菌后待固体培养基冷却至

附近操作进行。其过程是：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；

②右手拿三角瓶使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；

③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，

右手将培养基倒入培养皿

④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置

倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程Φ形成的水滴落到培养基表面。

也不要把培养基沾在皿壁上

空气中杂菌会在这些粘附培养基

上繁殖，并污染皿内培养基

①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用.
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1：10稀释.
③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上.用平板划线分离法进行分离.
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时.培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中心呈暗蓝黑色,发金属光泽.
⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）.
分离菌接种麦康凯培养基37 ℃ 24 h后,呈现边缘整齐或波状、稍突起,表面光滑湿润,直径1 mm~2 mm、粉红色或深红色的圆形菌落,在伊红美蓝琼脂上呈紫黑色带金属光泽的圆形菌落,在普通琼脂平板上呈灰白色,直径1.5 mm~2 mm的圆形菌 FL) 落；细菌涂片染色检查为革兰氏阴性、大小一致嘚杆菌.
3株地方分离株分别接种到三糖铁培养基上,经37 ℃ 72 h培养,产酸、产气,不产生硫化氢.生化特征为：分解葡萄糖、乳糖、甘露醇,产酸产气；分解阿拉伯糖；吲哚试验、甲基红试验呈阳性反应；尿素酶、明胶液化、柠檬酸盐利用试验,VP试验等呈阴性反应.
对分离的3株地方菌株分别用中國兽药监察所提供的大肠杆菌“O”抗原定型血清进行分型.其中2株血清型分别是O2、O35,另1株未能分型.