Spectrum100电化学工作站原理中打印不出结果，什么原因
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时间：2017-11-16 20:50
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agilent HPLC化学工作站操作培训
Agilent 1100 化学工作站 操作培训日 Agilent 1100 化学工作站培训日程安排第一天 上午： 1 2 3 下午：1 欢迎，相互介绍 液相色谱基础 HPLC仪器工作原理 Agilent 1100 硬件的结构及特点 （真空脱气机、泵、自动进样器、检测器） 2 Windows操作系统简介 3 化学工作站的重新安装、配置及启动 4 练习（实验一）第二天上午：1 化学工作站View菜单介绍 2 方法的编辑、修改、存贮及运行 3 Agilent 各部件采集参数设置 4 填写样品信息表、进样分析（实验二） 下午：1 数据处理参数设置 （谱图优化、积分优化） 2 练习 3 谱图处理、手动积分No.2 第三天上午：1 各种定量方法原理及其优缺点 2 建立多级外标校正曲线，用外标法定量 3 练习（实验三） 下午：1 建立多级内标校正曲线，用内标法定量 2 再校正、设定报告类型 3 练习（实验四） 4 高级功能简介（序列、DAD光谱功能……） 上午：1 系统日常维护和保养 2 工作站故障诊断功能的应用 3 Agilent 1100泵的维护 （拆泵头，更换泵头消耗品） 4 Agilent 1100检测器的维护（VWD、DAD易耗品的 更换，清洗流通池） 5 练习 结业午餐第四天下午：1 考试 2 发结业证 3 自由练习、讨论No.3 第一章 色谱基础本章内容：?液相色谱发展史?液相色谱的基本概念 ?影响峰形扩展的因素No.4 历史回顾1906 - Mikhail Semenovich Tswett ()碳酸钙吸附剂 石油醚 1940‘s - 分配色谱和纸色谱 1950‘s - 气相, 薄层，凝胶过滤色谱 梯度洗脱色谱 1960‘s - 商业高效液相色谱.HC3CH2CH 3N Mg NNCH3N CH 30 0 0 0 0CH 3CH3CH3CH3M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)No.5 柱色谱玻璃柱重力 洗脱硅胶 氧化铝 纤维素 糖类粉末装载 样品装载 溶剂滤网Volume (mL) Time (hr)150 4.0100 3.0 2.0501.010No.6 高效液相色谱 (HPLC)进样口 混合器 泵 色谱图 色谱柱检测器溶剂No.7 液相色谱类型Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak BasesModeStationary PhaseMobile PhaseReversed-PhaseC-18, C-8, C-4, C-2Water/Organic ModifiersIonics, Bases, AcidsIon-PairC-18, C-8Water/Organic Ion-Pair ReagentCompounds Insoluble in Water, Organic IsomersNormal-PhaseSilica, Amino, Cyano DiolOrganicsIonics Inorganic IonsIon ExchangeAnion or Cation Exchange Resin Polystyrene SilicaAqueous/Buffer Counter IonHigh MW Compounds PolymersSize ExclusionGel FiltrationAqueous Gel PermeationOrganicNo.8 色谱参数 －定性和定量tR(B)tR(A)Detector Responset0Inject A BW TimeAWBt R = 保留时间 t 0 = 死时间W = 峰底宽度R=2K’=tR(B) - tR(A)WA + WB= 1.176tR(B) - tR(A)W1/2A + W1/2BtR-t0 t0No.9 不同R值的峰重叠0.40.50.60.70.81.001.25R=1.5可以得到基线分离No.10 影响R值的因素R=Δt W=1/4Nxα- 1 α选择性xk' 1 + k'柱效容量因子No.11 容量因子各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的 变化增大或缩小溶剂洗脱强度弱 mA U 60% Acetonitrile 40% Water300 100 2 4 Time (min.) 6 8 10增加流动相的洗脱强度，降低了洗脱物的容量因子溶剂洗脱强度强 mA U
2 4 Time (min.) 6 8 1080% Acetonitrile 20% Water对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2 到2/3。No.12 分离选择性(α)α= k' Bk' AABA BA B231212t0=1α=k' B k' A=1.64 1.58=1.04α=1.15 0.85= 1.35α=0.95 0.63=1.50改用不同的流动相 改变流动相的组成 改变流动相pH值 改变柱温 应用特殊的化学效应 改变固定相改变分离选择性α的方法No.13 温度对分离选择性α的影响40 ℃60℃05 Time in Minutes10No.14 柱效Detector Response Inject低柱效高柱效TimeNo.15 计算柱效tRInjectW 1/2W TimeBN = 16t R WB L N2 = 5.54t R W 1/22HETP =No.16 扩散范德姆特方程 The Van Deemter EquationA = 涡流扩散 B = 自由分子扩散 C = 传质阻力HETPB uA线速度No.17 扩散A = 涡流扩散――多径扩散仔细填充柱子 使用均一的载体初始 带宽H E T PA线速度最终 带宽No.18 扩散B = 自由分子扩散――纵向扩散在液相中影响小 在低流速中影响大H E T PB?线速度No.19 扩散C = 传质阻力 在低流速下可以降低传质阻力 使用小颗粒载体可以降低传质阻力H E T P流动相线速度固定相滞流的 流动相No.20 扩散范德姆特方程 The Van Deemter EquationA = 涡流扩散 B = 自由分子扩散 C = 传质阻力HETPB uA线速度No.21 柱外效应I. 样品体积 II. 连接管路的体积 III. 色谱柱进口设计 IV. 色谱柱出口设计 V. 检测池体积 ( & 10 ?L )VI.降低输出回路响应时间No.22 不同分离度比较Poor efficiency Moderate selectivity R=1Poor efficiency Good selectivityR = 1.5Excellent efficiency Poor selectivity R = 0.5Excellent efficiency Moderate selectivityR=4No.23 如何提高分离度通过下述方法增加保留时间:选择合适的分离参数 增加色谱柱长度 增加固定相浓度通过下述方法降低谱带宽度:使用均一的载体 仔细填充柱子 选择粒度小的载体 优化流速 减小进样量 降低系统死体积 降低输出回路响应时间No.24 第二章 HPLC 仪器工作原理本章内容：?往复活塞泵的结构及工作原理 ?手动进样器（六通阀）结构及工作原理 ?常见检测器检测原理No.25 溶剂传输系统往复活塞泵(单向阀)Gold Seal Sapphire Insert Ruby Ball Spring InsertNo.26 溶剂传输系统减小流量脉冲－并联柱塞泵P 单向阀 B A A B 柱塞A前进Single Piston Delivery PCombined Delivery柱塞B后退相消干扰 通常也需要阻尼器 增加了单向阀的使用数量No.27 溶剂传输系统消除流量脉冲－串联柱塞泵单向阀PAgilent 1100 Series Pumps: Solvent Compressibility CompensationPiston Displacement (l)0System Pressure&0System Pressure=0脉冲阻尼器100One Piston Cycle TIME减少了单向阀用量 需要阻尼器 压缩因子补偿w/o compensation with compensationFor internal use only 11No.28 手动进样器－六通阀LoadSample Syringe To WasteInjectTo WasteTo Column Sample Loop (Fixed Volume) To Column From PumpFrom PumpNo.29 检测器使用统计43.0%UV-VIS DAD Fluorescence Refractive Index 22.0% 4.0% Electrochemical 1.0% 5.0% 7.0% 10.0% 8.0% Conductivity Mass spec OthersNo.30 Necessity for More than One DetectorSensitivityUV-signalWL 241/394WL 270/388WL 248/411WL 302/420WL 247/504FluorescenceSolv.: H2O/CH3OH= 10:90 PAH's Col.: Sup.LC-PAH 150x4.6No.31 Necessity for More than One DetectorSelectivityFlecainide in SerumUV signal FL signalTherapeutic concentration: 1.8mg/l, 20ul injected UV and fluorescence signalNo.32 需要多个检测器Qualitative InformationChlortoluron ? Atrazine ?Take peak spectrum (UV)Take peak spectrum (MS)200 58 215 44 68 96 104120172 132140138 158160 180 200 220200Wavelength (nm)2506080100Mass/ChargeNo.33 紫外－可见检测器根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。Detector Cell Io C b ILogI0 = 入射光强度 I = 透射光强度 A = 吸光度I0 I= A = abca = 摩尔吸光系数 b = 检测池长度c = 溶质浓度No.34 发色团吸收波长ChromophoreAmine Ethylene Ketone Ester Aldehyde Carboxyl Nitro Phenyl NaphthylStructure- NH 2max(nm)195 190 195 205 210 200-210 310 202, 255 220, 275-C=CC=O - COOR - CHO - COOH - NO2-max= wavelength of absorption maximumNo.35 Instrumentation - Absorbance DetectorsVariable Wavelength (UV/Visible)Slits Light Source Detector Elementflow Cell Mechanical Grating MonochromatorNo.36 Instrumentation - Absorbance DetectorsPhotodiode Array (UV/Visible) Light Source Holographic GratingSlitsLensesFlow CellPhotodiode ArrayNo.37 DAD - Peak PurityGraphical and Numerical ResultsSpectraPurity Match 764Purity Match 999200Wavelength (nm)400200Wavelength (nm)400Signalimpurepure7.67.88.0Time (min.)8.28.6No.38 InstrumentationFluorescence DetectorsGrating - Grating Flow CellExcitation Light SourceEmission Variable Excitation and Emission WavelengthsPhotomultiplier TubeNo.39 InstrumentationRefractive Index DetectorsBeam Deflection Fresnel Prism Laser InterferometerReference CellSample CellPhotodiodes Sample Reference Sample ReferenceNo.40 第三章 固定相结构本章内容：?固定相载体结构 ?正相色谱固定相 ?键合相色谱固定相No.41 Particles of Column Packings50?m Large Porous Particles30?m 2?m Active Surface Pellicular Beads3-10?m MicroparticulatesNo.42 Typical Column Packing SupportsOH Si O Silica Gel SurfaceOH O Si OOH Si Si O O O Si OHChemically Modified Silica Gel Pores Si Si Si SiCH 3 Si - O - Si - (CH2)17CH3 CH 3SiNo.43 正相 HPLC极性固定相 有机流动相传统 目前硅胶 氧化铝 氰基 二醇基吸附色谱键合相氨基适用于: 同分异构体的分离. 在有机/水流动相中不溶化合物的分离. 适用于中等极性化合物分离.No.44 吸附色谱保留机理O H Si O O H O R O Si O Si O O H机理 H-键 偶极矩 -键 溶质顶替等量的溶剂 固定相 硅胶 氯化铝H O R流动相 有机溶剂No.45 吸附色谱中的保留small k'saturated hydrocarbons olefins aromatic hydrocarbons, organic halides sulfides ethers nitro-compounds esters, aldehydes, ketones alcohols, amines sulfones sulfoxides amides carboxylic acids非极性 不保留large k'极性 被强烈 吸附No.46 硅胶柱和氧化铝柱的缺点容易脱尾 样品被催化分解 不易梯度洗脱含水量要控制No.47 正相色谱键合相SiOCH 3 CH 2 Si CH 3DiolCH OH CH 2 OHCyanoSi OCH 3 Si (CH 2) CH 3nCNAmineSi O CH 3 ( CH 2 ) n Si CH 3 CH 2 NH 2No.48 键合相柱优点固定相不易被流动相洗脱 无需饱和色谱柱 非常容易进行梯度洗脱 柱子平衡非常快 使用极性范围宽 选择性唯一 柱容量大 溶质不易污染柱子No.49 第四章 Agilent 1100 系统硬件概观G1310A G1322A G1314AIsocratic pump G1312AVacuum degasser G1313AVariable wavelength detector G1315ABinary pump G1354AAutosampler G1316ADiode-array detector G1323APlus, Manual InjectorQuaternary pumpThermostatted column compartmentControl moduleNo.50 堆积配置? ?优化流路减小死体积 流路自上而下溶剂柜 脱气机 泵自动进样器柱温 箱手持控制器检测器No.51 连线每个部分有独立的电源 1100各部件均由CAN线连接 检测器与化学工作站之间用 LAN线连接 (或用HP-IB连接) 脱气机与泵之间用遥控线连接 (错误信号输出) BCD板用于外设和读取样品瓶数 量? ? ??外设 (x4)?HP-IBNo.52 指示灯状态6种LED仪器状态：Off (power off) Ready (power on) Not Ready Run Error ResidentBlack Black Yellow Green Red Yellow blinking仪器LED 状态显示Blink电源开关显示No.53 FittingsSwagelokWaters0.090 in.0.130 in.ParkerRheodyne0.170 in. 0.090 in.ValcoUptight0.090 in.0.080 in.Troubleshooting LC Fittings, Part II. LC/GC Magazine 6:788 (1988)J. W. Dolan and P. Upchurch.No.54 HP Capillary Color CodingColor Red Green Bluei.d. 0.12 mm 0.17 mm 0.25 mmNo.55 第五章 Agilent 1100 泵和在线脱气机Agilent 1100系列泵,G1310A, G1311A, G1312A, G1354A 和Agilent 1100 系列在线真空脱气装 置(G1322A)No.56 Agilent 1100系列真空脱气机性能 /用途 ?与He脱气相比，更方便，更节省费用。 ?高性能脱气，避免了烦琐的操作，提高 仪器稳定性。 ?内部延迟体积小，便于快速进行溶剂切 换。 ?4通路系统，操作灵活。 ?与1100其它组件堆积在一起，用遥控线 连接，用于传输错误信号。建议 ... ?低压混合进行梯度洗脱，提高 泵的可靠性能。 ?提高泵在低流速下的操作性能 ?用于需要脱氧的检测器No.57 The HP 1100 Vacuum Degasser (G1322A)SolventABCDPumpNo.58 Agilent 1100 系列 On-line Degasser 设计控制组件 真空室电磁阀ABC真空泵DNo.59 在线真空脱气机工作原理1 ml Solenoid valveNo.60 HP 1100 Series On-line Degasser: Influence on Detector BaselineSolvent: UV signal: 210 nmno degassingAbsorbencyhelium degassingHP on-line degassing123456789Time (min)No.61 Agilent 1100在线真空脱气机对保留时间在现性的影响 溶解酵素分析mAU60 50 40 30 20 10 0First analysisLast analysis after 30 hoursHelium Degassing242526272829mAU 60 50 40 30 20 10 0 24 25First analysisLast analysis after 30 hoursOn-line Vacuum Degassing29262728No.62 低流速下Online-Degassing 对保留时间和峰面积的影响Column Column Dimension ODS Hypersil, 5?m 2.1×100mmSampleMixture of CaffeinePrimidone, PhenacetinMobile Phase2 6 1 0m i nFlow15% Acetonitrile/Water 0.22ml/min 40? C 220/8 Ref450/80nmRatew i t h o u t d e g a s s i n gTemperature Detection1 . 2 1R e t e n t i o n P e a k a r e a s0 . 8 t i m e s 0 . 6%RSD2 6 1 0m i n0 . 4 0 . 2 0w i t h d e g a s s i n gw i t h o u t w i t h w i t h o u t w i t h d e g a s s i n gNo.63 Agilent 1100系列单元泵－G1310A特征/用途 ?流量范围宽，用途广泛：0.5 ~ 10 ml/min ?双柱塞，可变冲程，以及阻尼器可以减小流量脉冲。 ?改进的阀系统可以延长使用寿命，降低维修成本。 ?容易维护和维修。 ?直接与溶剂瓶，清洗阀和管路连接，便于快速启动。 ?可以升级至四元泵。建议 ... ?常规质量控制分析 ?简单混合物的分析 ?用于体积排阻色谱 ?半制备工作加真空脱气机,?流量范围可扩展至： 0.2 - 10 ml/minNo.64 Agilent 1100系列单元泵 (G1310A)瓶头组件溶剂瓶泵头溶剂柜 阻尼器1. 单向阀 2. 冲洗阀 3. 主动阀泵No.65 单元泵工作原理DamperOutlet Ball ValvePurge valveActive Inlet ValveSealPistonBall Screw Drive GearAuthoring Division Name File Name Security Notice (if required)Motor with EncoderNo.66 泵头 - 单元/四元泵Pump head screwsLock ScrewNo.67 泵头结构图5Holding/Lock Screw (PEEK)Seal23 4617Seal:No.68 阀－ 单元泵/四元泵new styleCartridge 8Frit7old style3142Outlet Ball Valve5Purge Valve6Active Inlet Valve(common to all except 1050)PTFE Frit: No.69 Agilent 1100系列密封垫冲洗－Seal Wash ( 可选)Washer?Seal?Support seal assembly?当流动相中盐浓度&0.01M时，使用 Seal Wash可以减小密封垫的磨损。 对于Agilent 1100系列泵为可选件 。 用10%异丙醇水溶液冲洗No.70 带有Seal Wash的泵头结构图3 21No.71 Agilent 1100系列四元泵－G1354A; 真空脱气机为标准配置!建议 ... ?使用2，4，8mm内径的柱子 ?流量范围从 0.2 到 10 ml/min ?应用于研究和常规分析特征/优点 ?四通路/低压混合能灵活地进行恒梯度或梯 度洗脱。 ?无需消耗昂贵的He而能进行高性能真空脱 气。 ?自动冲程调节，混合非常均匀，降低基线 噪音。 ?对于高盐流动相，可选择Seal Wash清洗密 封垫。No.72 Agilent 1100系列四元泵－G1354A 包括真空脱气机溶剂柜真空脱气机 G1322A四元泵 G1311ANo.73 四元泵工作原理Vacuum Chamberfrom solvent bottlesDamperMCGV AIV OBV 比例阀 主动阀 单向阀Purge Valve AIV OBV MCGVAuthoring Division Name File Name Security Notice (if required)to injection deviceWasteNo.74 Agilent 1100系列二元泵－G1312A建议 ... ?使用4mm内径柱子 ?流量范围从 0.5 到 5 ml/min优点/特征 ?高压混合，无需脱气。 ?对于有强紫外吸收的流动相，使用静态混合器可以降低基线噪音。 ?可以选择溶剂切换阀自动进行溶剂切换 ?对于高盐流动相，可选择Seal Wash清洗Seal。增加真空脱气机, ?流量范围可扩展至 0.05 ～ 5 ml/min ?推荐使用1，2，4mm内径的柱子。No.75 二元泵工作原理Purge valveDamperMixerWaste Inlet valveOutlet valve Inlet valveOutlet valveABNo.76 带有溶剂切换阀的二元泵DamperMixer Restriction CapillaryMixing Capillary ClampAA1 A2B1 B2BSolvent Selection ValveNo.77 阀: 二元泵new styleCartridgeSieveold styleOutlet Ball Valve Active Inlet Valve(common to all except 1050) (unique to the binary pump due to the presence of the sieve)Purge Valve(common to all)No.78 HP 1100 Series Pumping Systems Flow Ranges OverviewG1312A G1322A G1354A G1312A G1310A G1322ABinary pump Quaternary pump Binary pump with degasser0.05-5 ml/min0.2-10 ml/min0.5-5 ml/minG1310A0.2-10 ml/minIsocratic pump with degasserIsocratic pump0.5-10 ml/minNo.79 系统延迟体积的比较(单位：?L)1090泵 不带混合器 带混合器 300-500 0 混合器 自动进样器 标准 旁路 V (loop) N/A 4.1 or 8.2 0 327 + V (inj) 8 15 0 300 + V (inj) 6.2 3 or 6 0 300 + V (inj) 6.2 3 or 6 01050800-1100 n/a n/a1100 四元泵800-1100 n/a n/a1100 二元泵180-480 600-900 420柱温箱 标准旁路 min Range Max Range 304-504 42-06189-489 906-1206No.80 第六章 Agilent 1100 自动进样器0.6 0.5 0.4 0.3Precision0.2 0.1 0102550100No.81 Agilent 1100 系列自动进样 器性能/优点进样体积重复性高 (典型& 0.5% RSD) ? 进样动态范围宽 ? 连续冲洗流路并有洗针功能－降低样品残留 ?所有驱动均采用电子驱动 ? 可以容纳不同规格的样品瓶 ?灵活的进样程序编制可以进行样品前处理 （例如柱前衍生） ?使用旁路可以降低延迟体积?推荐 … 进样体积从0.1? L到1.8 ml ? 最多可容纳100个样品瓶 ? 自动样品前处理?No.82 Agilent 1100 系列自动进样器扩展进样范围选择性能/优点推荐 …??? ?非常灵活的扩展动态范围 进样量准确 可以从现有系统升级? ?大体积进样 标准和带加热的自动进样器 新的或现有系统No.83 自动进样器管路连接From pumpTo column compartmentNo.84 Agilent 1100 系列自动进样器结构100 x 2ml 样品盘计量泵40 x 2ml 样品盘 样品管带机器手 的传输臂进样阀 样品盘 15 x 6ml 样品盘No.85 标准进样过程 ...Metering device Sampling unit From pump To column 6-port valve To waste准备位置调用样品瓶 吸样品进样和运行位置No.86 不同进样体积下的峰面积精度RSD (%)0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 1 3 5 7 9 10 25 50 100Injection Vol. (? l)No.87 Agilent 1100 系列自动进样器进样测试Repetitive 1 ? l injections from 10 ? l samplemAU 100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 min#1#5#8#10No.88 Agilent 1100 系列自动进样器进样线性Area Counts2000Correlation: 0.9999951000020406080100Injection Volume (? L)No.89 Agilent 1100 系列自动进样器 样品容量? ? ? ??进样量? ? ?100 x 2 ml vials in 1 tray 40 x 2 ml vials in 1/2 tray 15 x 6 ml vials in 1/2 tray 117 x 2 ml vials with external tray Micro vials for small volumes Standard: 0.1-100 ?l Up to 1.8 ml using multi draw option Expanded injection range: 0.1-900 ?l 5-100 ?l 1-5 ?l typically &0.5% RSD typically &1% RSD typically &0.1% typically &0.05%精度? ?残留? ?Without needle wash With needle wash延迟体积? ?Standard 300 ?l+injection volume In bypass mode 6.2 ?lNo.90 Agilent 1100系列自动进样器特殊功能?洗针 把样品残留降低到最小限度 多次吸液 用于进样量大于100?L 旁路 减小延迟体积 进样程序 非常灵活地执行进样系列???No.91 Impact of Needle Wash on CarryOver with Capped and Uncapped Wash VialsWithout needle wash With needle wash, wash vial uncapped With needle wash, wash vial capped0.35 0.30.35 0.3Carry -over (%)PrimidoneCarry- over (%)0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.1 0.50.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.1 0.5Phenacetine1515Injection volume ( ?L)Injection volume ( ?L)No.92 使用洗针程序可以降低样品残留mAU 4Sample:0.01 M 咖啡因, 普里米酮 , 非那西汀 1? LInjection volume:样品残留峰Blank injection (1? L) with needle wash 0 Blank injection (1? L) without needle wash 5 10 minNo.93 带有多次吸样装置的自动进样器?Injection range: 0.1 - 900?L Up to 1800?L with Multi-draw kit?900?L needle900 ?l loop extension900? L metering device SamplingunitFrom pump To columnloop extension for multi-draw To wasteNo.94 Agilent 1100 自动进样器进样程序? ?用于样品衍生或样品前处理 进样量从 0.5 到 5 ? lSample Reagent Metering deviceSampling unitFrom pump To column使用多次吸样 可以扩展进样量To wasteNo.95 Agilent 1100 系列带加热的自动进样器性能/优点半导体控制，可以非常方便、准确的升温和降温 ? 控温范围: 4- 40℃(室温为25℃) ? 可容纳100个样品瓶 (冷却) ?可更换样品盘?推荐 ...对于热依赖性的样品使用 ? (生化)制药行业 ? 临床实验室?No.96 自动进样器加热原理热交换器室温空气入口加热 / 冷却部件半导体部件热空气出口No.97 自动进样器测试功能?维护情况:C更换针C更换针座C更换机器臂对机器臂定位 ? 分步命令?No.98 第七章 Agilent 1100 柱温箱TCCNo.99 柱温箱的特征及优点推荐 ... ?温度控制范围： 低于室温10℃～80℃ ?保留时间的再现性需要稳定 的温度 ?如果需要在高于或低于室温 进行分离操作时，需要使用 柱温箱特征/优点 ?大空间，可以容纳三根30cm长色谱柱 ?更换柱子非常方便 ?降温非常方便 ?安装柱识别可以记录进样次数 ?使用切换阀可以进行柱切换(可选) ?两个单独的加热区可以分别控制温度 ?可以进行程序升温 ?内部死体积小(左侧3? L，右侧6? L)No.100 HP 1100 柱 恒 温 与 普 通 柱 温 箱 比 较71.30 71.20 71.10 retention time 71.00 70.90 70.80 70.70 70.60 70.50 70.40 1 2 3 4 Hours 5 6 conventional column oven 7 8 9 10day nightHP1100 column thermostat with Peltier heating and coolingdayColumn:250 x 1 mm Vydac TP 218; Eluent: Water/Acetonitrile + TFA RT fluctuations of peptide peak over a sequence of 10 consecutive tryptic myoglobin maps.No.101 室温下的柱温控制性能mAU30Environmental Application4 3 1 2 6 5 78 9 12 13P e a k C o m p o u n d% R S D o f R T 1 N a p h t h a l e n e0 . 1 2 2A c e n a p h t h e n e 0 . 1 7 3 F l u o r e n e 0 . 0 9 4P h e n a n t h r e n e 0 . 0 9 5 A n t h r a c e n e0 . 0 8 6F l u o r a n t h e n e 0 . 0 8 7 P y r e n e 0 . 0 8 8B e n z ( a ) a n t h r a c 0 . 0 9 9 C h r y s e n e 0 . 1 0 1 0B e n z o ( b ) f l u o r . 0 . 1 0 1 1B e n z o ( k ) f l u o r . 0 . 1 025 min2510 11 14 15201510505101520Sample Column Column Temp Flow rate Mobile Phase GradientPNA EPA Standard 250 x 2.1 mm PAH, 5 ?m 18℃ 0.4 ml/min A: water B: acetonitrile 50 to 95 %B in 22.5 min1 2 B e n z ( a ) p y r e n e0 . 0 8 1 3D i b e n z ( a ) a n 0 . 1 0 1 4B e n z ( g h i ) p e r y0 . 1 1 1 5 I n d e n o ( 1 2 3 ) p y0 . 1 0PNAs/PAHs improve at sub-ambient!No.102 PNAs分析条件优化－柱温10 111415mAU56 8 9 712 13 16 17Column Temp 18°C 25°C 30°CP e a k # C o m p o u n d 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 N a p h t h a l e n e A n t h r a c h i n o n e A c e n a p h t h e n e F l u o r e n e P h e n a n t h r e n e A n t h r a c e n e F l u o r a n t h e n e P y r e n e B e n z ( a ) a n t h r a c C h r y s e n e B e n z o ( b ) f l u o r . B e n z o ( k ) f l u o r . B e n z ( a ) p y r e n e D i b e n z ( g h ) a n B e n z ( g h i ) a n B e n z ( g h i ) p e r y I n d e n o ( 1 2 3 ) p yNo.103301 234201005 10 15 20 25 minSample Colum Mobile phase 50:50 Flow rate Gradient min Column Temp:PNA EPA Standard 250 x 2.1 mm PAH Water/Acetonitrile0.4 ml/min from 50 to 95 %B in 22.5 18, 25 and 30 °C 柱温箱前视图....From AutosamplerTo Flow Cell Inlet CapillaryNo.104 柱识别系统Product number Serial number Batch number Geometry [mm] Stationary phase Particle size Number of injections Maximum pressure allowed [bar] Maximum temperature recommended [C]recommended Maximum pH 79916O D-552 5 100x2.1 ODS Hypersil 10 ?m 999 400 70 12柱识别必须安装在距离识 别天线2mm范围之内，且 柱识别上HP的图标朝上。No.105 柱切换阀 (可选)(Rheodyne 7750)Vespel rotor seal (6Ceramic stator port)Electronic ActuatorNo.106 第八章 Agilent 1100 检测器VWD/DADNo.107 Agilent 1100 VWD检测器性能/优点...?从190－600nm波长范围，噪音小，基线稳定(±0.75x10-5 AU)?可变波长检测，可以对不同物质的检测获取更换氘灯及清洗检测池非常方便 内置钬玻璃可以非常快速方便地进行波长校 根据不同需要选择不同的流动池。推荐 …?最大灵敏度。? ?产品开发及质量控制 应用需要高灵敏度检测器?准。?No.108 Front Elements-VWDlamp流动池的后压非常重要，使用正 确的出口连接管。No.109 光学单元 - VWD光路氘灯光源透镜 滤光片（钬玻璃/遮光）入射狭缝样品光电二极管 数模转换板反射镜1＃ 流通池 光栅分光器 反射镜2＃ 参比光电二极管 数模转换板No.110 VWD 检 测 器 灵 敏 度AU 0.000310 pg AnthraceneSignal: 0.23 mAU Baseline noise: &1x10-5AU0.000250.00020.000150.00010.000050012345minSample Column Mobile phase Flow rateAnthracene standard 100 x 2.1 mm ODS Water/Acetonitrile 30:70 0.4 ml/minNo.111 多组份分析mAUGinko Biloba extractQuercetin KaempferolSensitive quantitation of active compounds at 370 nm30002500Monitoring impurities at 204, 254 nm2000Isohamnetin204nm15001000370nm5000254nm0 2 4 6 8 10 12 14 16 18minNo.112 选择性和灵敏度HydroxybenzotriazolemAU1200Quantitation of antibioticsTrimethoprim1000800Chloramphenicol Nalidixic Acid Furazolidone 204nm600400254nm200368nm0 0 2 4 6 8 10 12 14 minNo.113 VWD流通池Standard and MicroHigh PressureNo.114 高性能的Agilent 1100 DADNo.115 Agilent 1100 二极管阵列检测器性能/优点...?灵敏度高 (±1x10-5AU)。 两个灯，波长检测范围宽（190－950 nm）。 1024个二极管 和 1 nm 狭缝 。 可变狭缝。 根据不同需要选择流动池。 可以进行自动峰检索 。 利用紫外谱图进行峰确认??推荐 ...? ? ? ??研究及方法开发 多波长检测 峰纯度检查 峰确认（定性）???No.116 Front Elements - DAD进口管可以直接连接到色谱柱钨灯氘灯流通池室No.117 DAD光路钨灯耦合透镜 氘灯光源透镜 (消色差透镜)阵列 支撑透镜氧化钬滤光片 Flow cell光谱透镜狭缝 光栅No.118 二极管阵列检测器与传统紫外扫描检测器比较DetectorSourceEntrance slitDiode-array detectorEntrance slit SourceExit slitFlow cellFlow cell Concave gratingConcave gratingConventional Scanning DetectorDiode-array DetectorNo.119 DAD流通池Std. and Semi-Micro Micro-High PressureNo.120 可编程光路狭缝--超微机械设计SlitMotorNo.121 可 编 程 光 路 狭 缝????Replaces three conventional slits Extends slit width to 1 and 16 nm For fast optimization of resolution, sensitivity and linearity Documents slit width for GLP traceabilityHP 1050 DADthree fixed slits for 2, 4 and 8 nmHP 1100 Seriesone programmable slit for 1, 2, 4, 8 and 16 nmNo.122 选择不同狭缝--灵敏度与分辨率0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 230 240 250 260 270 280 nm0.7 mAU 1 nm slit 2 nm slit1 nm2 nm 4 nm 8 nm & 1x10-5AU noiseNo.123 190-950nm宽波长范围－ 有利定性分析Tartrazine Amaranth Patent blue Brilliant blueHPLC detectionAbsorbanceOther diode-array detectorsHP 1100 Series300400500600700800900Wavelength (nm)Now 190-950nmNo.124 定性分析--峰纯度检验pureAbsorbanceimpure7.67.88.08.28.4Time (min)Purity Match 999Purity Match 764Absorbance200Wavelength (nm)400200Wavelength (nm)400No.125 定性分析--探索三维立体影像Spectral Acquisition Modes ?All spectra ?Every 2nd spectrum ?All in peak ?Apex+Slopes+Baselines ?Apex+Baselines ?NoneAbsorbanceNo.126 DAD测试功能及诊断? ? ? ? ?DAD自检 暗电流测试 灯强度测试 钬玻璃测试 流通池测试? ? ?滤光片测试 波长校正 模拟信号输出测试No.127 第九章 熟悉化学工作站及其操作系统本章内容：?Windows NT及Windows2000概述?如何创建快捷键?如何维护计算机系统No.128 Windows 界面：通过此键进入磁盘及文件目录。垃圾斗，用于盛放被删除的子目录及文件任务栏Start键用于开启某个应用程序No.129 Windows菜单用鼠标单击Start键，所有菜单均显示出来。Program: 包括Windows Explorer, Word Pad, Paint, HP ChemStationDocument: 显示最近使用过的15个文件。Settings: 包括Control Panel, Printers, TaskbarShutdown: 用于关闭计算机。No.130 Windows的一些有用的功能：?把常用执行程序放在 Start菜单的第一级。 用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开Windows Start Menu窗口，用 鼠单击Program图标，打开Windows/Start Menu/Program窗口，用鼠标右键拖 拽所需应用程序图标到Windows Start Menu。当再打开Start 菜单时，所选择 的应用程序显示在Program菜单之上。 Windows/Start/Program窗口Windows Start Menu 窗口No.131 ?在 Desktop 创建快捷键。用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开Windows Start Menu窗口， 用鼠单击Program图标，打开Windows/Start Menu/Program窗口，用鼠标右 键拖拽所需应用程序图标到Desktop上。此步骤完成后，所需应用程序图 标显示在Desktop上。 ?改变 Desktop的属性：用鼠标右键单击desktop的任意位置，在出现窗口选 择Properties, 在Display Properties窗口选择设置项目。No.132 计算机操作系统的维护?经常性删除临时文件子目录中及垃圾斗中的文件。 ?使用ScanDisk或Checkdisk检查盘上的错误。 ?消除硬盘上的碎片。 ?使用杀病毒软件。 ?创建Emergency Repair disk (Windows NT)。――运行rdisk。 如果计算机被非法关机，临时文件子目录中会留下许多临时文件，如果不及时 清除，这些文件会影响系统的性能。所以，这些文件应定期删除。 Windows中有许多工具可以帮助你对操作系统进行维护。ScanDisk和 Disk Defragmentor是非常重要的两个工具。ScanDisk可以扫描硬盘的坏区，然后或者 对坏区进行修复，或者锁定坏区。Defragmentor通过去除硬盘上的碎片来提高 系统的操作性能。No.133 工作站软件及文件的维护? 化学工作站软件目录结构C:ExcelHpchemWindows12BackupCoreDriversGcHelpenuLanguageLcRepstyleSpeclibsSysDataMethodsSequenceTempVerifyDemoLab1.d所有数据文件均存放在Data子目录下，扩展名为 .D，每个数据文件为Data子 目录下一单独子目录，里面包括各种扩展名的文件：?.CH－色谱图文件 ?.UV－紫外谱图文件 ?.MAC－样品信息文件 ?.REG－二进制文件?.LOG－logbook文件?.M－方法文件（存贮数据时选择方法存贮在数据文件中）No.134 所有方法文件均存贮在Method子目录下，扩展名为.M。 所有序列文件均存贮在Sequence子目录下，扩展名为.S。?定期拷贝有用的文件。在工作站中有用的文件是指： 1. 数据文件(xxx.D)。 2. 方法文件(xxx.M)。 3. 序列文件(xxx.S)。 定期拷贝这些文件后，清除工作站子目录下的这些文件，以节省硬盘空 间，使运算速度正常。 ?禁止使用盗版软件，建议在运行工作站的同时，不要使用中文操作平 台，防止与工作站发生冲突。No.135 It’s Lab Time Now!No.136 启动化学工作站配置仪器 启动化学工作站任务安排No.137 Instrument On-lineONON联机操作，进行仪器控制操作Instrument off-lineON脱机操作，进行数据分析OFFNo.138 化学工作站界面Top Tool Bar Status Tool Bar样品视图系统视图Online SignalNo.139 化学工作站Views菜单ViewsMethod and Run Control ?Data Analysis ?Report Layout ?Verification (OQ/PV) ?Diagnosis?Full menu or short menuNo.140 在化学工作站中有5个功能界面： ?Method and Run Control ?Data Analysis ?Report Layout ?Verification (OQ/PV) ?Diagnosis Method and Run Control－仪器控制; 方法编辑、运行; 序列编辑、运行。 Data Analysis－数据分析：包括谱图优化，积分优化， 校正表建立，报告格式选择等。 Report Layout－用户编辑个性化的报告格式。 Verification (OQ/PV)－仪器认证。 Diagnosis－利用工作站诊断仪器硬件。No.141 Change ViewsNo.142 第十章 方法编辑、保存本章内容：方法中所包含的内容。 ? 如何编辑采集参数。 ? 如何显示Logbook及实时显示检测信号。?No.143 什么是方法??方法：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要的所有参 数：数据采集参数、 数据分析参数及命令或宏指令。 ?方法的文件名为：xxx.m。方法的组成：方法信息(Method information) ?仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) ?数据分析参数(Data Analysis) ?运行时间表(Run Time Checklist)?No.144 用户图形界面（GUI）单击图标打开菜单单击此图标进行控制No.145 Instrument 菜单 - 改变每个部件的参数No.146 编辑一个方法使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法No.147 选择所要编辑的内容No.148 方法信息 (Method Information)No.149 泵的操作参数包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(Stop Time)，后运 行时间(Post Time)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(Pressure Limits)等No.150 自动进样器参数??样品盘容量 ?100 x 2 ml vials in 1 tray ?40 x 2 ml vials in 1/2 tray ?15 x 6 ml vials in 1/2 tray ?Microvials with sleeves 进样体积 ?0.1 - 100 ul－标准进样 ?最大 1800ul－ 使用多次进样装 置 ?最大900 ul 进样，不使用多次进 样装置，但需要扩展进样装置设置参数包括：进样体积(Injection)，洗针(Needle Wash) ，程序进样(Injection Program) 优化进样(Optimization)，取样速度(Draw Speed)，注射样品速度(Eject Speed)，取样位 置(Draw position)，时间设置(Time)等。No.151 自动进样器特殊功能?洗针 降低样品残留 多次吸样 用于进样体积大于100μ L?计量泵?旁路 标准进样系统的整个延迟体 积为300μL, 切换到旁路后 延迟体积降到 6.2μ L。进样程序 根据需要编制进样程序泵 色谱柱 废液 4通路旋转密封阀?最大动态进样范围: 0.1 ?l-1.8 mlNo.152 进样程序进样体积从 0.5 至 5 ?l。 用于样品衍生及其前处理。? ?样品反应物 计量泵取样系统泵 柱子废液No.153 柱温箱?控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次数????No.154 DAD参数设置可以选择存储 5 个信号 ?信号波长范围 191 - 949 nm ?可变狭缝： 1, 2, 4, 8, 16 nm ?可以时间编程 ?可以保存数张或所有光谱?No.155 运行时间表(Run Time Checklist)选择在方法中要执行的项目No.156 存贮方法从Method菜单选择Save Method / Save Method as或从存贮方法工具图标 存贮方法。No.157 选择监控信号从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change，在Edit Signal Plot窗口选择要监控的信号。No.158 信号显示No.159 运行方法要分析单个样品, 从RunControl菜单选择 Sample Info..., 输入样 品信息。样品信息包括：操作者姓名(Operator Name)，存盘数 据文件(Data File)，样品参数(Sample Parameters)。然后运行方 法(Run Method)。No.160 补充说明1. 查看Logbook:从View菜单选择Logbook，单击Current Logbook显示当前Logbook内容。No.161 2. 泵的辅助功能Instrument ? More Pump? Auxiliary...从泵的辅助功能可以设 置最大升流速率，冲程 大小，压缩因子补偿。No.162 泵的控制与检测器的控制类似检测器: 灯开/关 (钨灯/氘灯) 自动开灯 模拟信号输出范围No.163 3. 自动进样器扩展功能No.164 自动进样器设置No.165 第十一章 谱图优化本章内容：?谱图调用?谱图优化 ?谱图加标注No.166 调用数据文件在Data Analysis界面，File菜单下选择Load Signal。No.167 谱图优化在Data Analysis界面下，Graphics菜单下选择Signal Options...使用 Signal Options... 功能来优化色谱图的显示No.168 谱图优化的工具色谱图控 制图标谱图优化图标设置标注格式 文字标注线形标注 删除标注单独/重叠显示 化合物名称 基线 轴移动标注WMF图标注谱图显示方式 保留时间显示 标题显示 打印窗口 拷贝No.169 在色谱图上加标注选择: ?字体和字型 ?字体大小 ?字体颜色、旋转角度等No.170 谱图处理工具谱图处理工具加标注工具Add Annotation ?Draw Line in Window ?Move Annotation ?Delete Annotation?No.171 第十二章 积分优化本章内容：?如何建立积分事件 ?如何使用信号选项框 ?如何使用积分时间表 ?自动积分 ?手动积分No.172 增强积分方式增强积分方式可以提供: ?当基线波动时，基线的定位。 ?使用初始峰高参数去除噪音峰。 ?控制积分开始和结束的标识。 ?在噪音中定位信号峰。 ?使用二阶导数确定肩峰。No.173 调用信号执行积分您也可以通过以下方式进行积分: ? 从 Integration 菜单选择 Integrate 或 Auto Integrate。 ? 选择积分工具。 ? 运行一个包括数据分析的完整方 法。No.174 自动积分?检查开始和结束区域，确定噪音。 ?赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. ?对第一次积分赋予一个临时峰宽值。 ?设置Area Reject为0。 ?执行测试性积分，有可能重复几次。 ?基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。 ?优化Slope Sensitivity和Height Reject。?从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。No.175 积分事件信号选项框 高级基线选择初始值No.176 高级基线Peak Peak Unassigned AreaBaselineAbsorbanceAdvanced Integration Options OffAdvanced Integration Options On121314151617181920Time [min.]No.177 积分事件表添加积分事件功能删除积分事件功能No.178 积分工具栏对当前色 自动积分 谱图积分积分任务积分事件设置Baseline Now 设置Baseline Hold 设置拖尾 切线撇去设置肩峰检测 设置固定峰宽 设置最小峰面积积分设置斜率No.179 作为方法的一部分存贮积分参数存贮积分事件到方法保存方法No.180 手动积分工具自动积分 选择积分工具 对目前色谱 图进行积分 积分事件手动积分 画基线手动积分 负峰手动积分 去除峰 手动积分 裂分峰手动积分 切线撇去No.181 手动积分?Draw Baseline ?Negative Peak(s) ?Tangent Skim ?Split peaks ?Delete Peak(s) ?All ValleysNo.182 峰类型符号峰起止点符号 B 基线 P 基线渗透V其它符号峰谷点H 水平基线T 切线撇去M 手动积分+ 参考峰A+ 面积加和峰 S 溶剂峰I 内标峰N 负峰警示符号+ 高于含量上限 － 低于含量下限No.183 基线符号B=基线 V=峰谷点BBBB P=基线渗透BVB H=水平基线BPBBHHNo.184 第十三章 校正及定量基础在这一节中您将学习:? 校正的概念 ? 校正的必要性 ? 如何进行校正? 建立回归线的作用No.185 校正? 校正即是利用某个峰的峰高或峰面积来确定其 对应 组分的浓度或含量? 当检测器灵敏度针对不同的组分而变化；及检 测器 对同一组分不同含量响应值发生变化时须做校正No.186 校正过程? 首先准备一个混合标样，其中感兴趣组分的浓度 须准确知道? 运行标准样品 ? 建立校正表 ? 运行待测样品并使用校正表分析它? 需要时进行再校正No.187 单级校正? 对每一峰只做一次校正?单级校正中做了如下假设： 响应因子不会因为某峰对应物质的含量 变化而发生变化响应曲线须通过原点No.188 单级校正因子响应值 (A或H)含量No.189 多级校正?? ?对每一峰需做至少两次校正可以补偿检测器对不同含量的样品组分而给 出非线性响应 响应曲线可以不通过原点No.190 多级校正过程? 首先准备一个混合标样，其浓度应高于欲分析物 浓度 ? 将浓标样等梯度稀释，运行每一级稀释好的标样 ? 在每一级上进行校正 ? 继续稀释混合标样，使其包含感兴趣样品的浓度 范围，并输入每一级对应的含量值 ? 运行待测样品并使用校正表分析它 ? 需要时进行再校正No.191 点到点校正曲线响应值(A或H)含量No.192 线性拟合（最小二乘法）响应值(A或H)含量No.193 非线性拟合响应值 (A或H)响应值 (A或H)含量含量No.194 工作站的定量方法在这一节中您将学习：?? ? ?各种不同定量方法的概念每一种定量方法固有的假定 明白在选择定量方法时须考虑的各种参数 观察选择了不同的定量方法时其结果的差别No.195 定量方法? 百分比法PERCENT ? 归一化法NORM%? 外标法ESTD? 内标法ISTD ? 外标百分比法ESTD% ? 内标百分比法ISTD%No.196 面积百分比法AREA%AREA(pk) AREA%= 假定检测器响应都相同 所有组分都流出 所有组分都被检测到ΣAREA(pk)x100%优点无需做校正 简单、快速的定量过程 进样量不要求严格缺点以上所有的假定 需测量所有的组分 所有的面积都必须准确No.197 面积百分比法举例面积值 C12 C14 C16 280 250 220 面积百分比法% 26.2 23.4 20.6C18320----------107029.9-----------100.1使用面积百分比法分析某脂肪酸甲酯样品中C12, C14, C16, C18的 含量。No.198 校正因子含量 面积100 3000100 2500200 4000绝对校正因子 RF=含量/面积RF值与组分的含量及其它组分的存在无关 RF值可以校正检测器响应No.199 脂肪酸甲酯校正因子计算举例面积值C12 C14 250 290面积百分比％20.2 23.4RF25/250=0.100 25/290=0.086C16C18330370 124026.629.8 10025/330=0.07625/370=0.068单点校正，标样为含C12, C14, C16, C18均为25ng的脂肪酸甲酯No.200 归一化法(NORM)RF(pk) x AREA(pk) NORM%= Σ[RF(pk) x AREA(pk)] x100%假定所有组分都流出 所有组分都被检测到优点简单、快速的定量过程 进样量不要求严格缺点所有组分峰都要流出 需测量所有的组分 必须校正所有的峰No.201 脂肪酸甲酯 归一化法NORM%举例面积 RF RFxAREA NORM%31.8% 24.4% 19.0% 24.8% 100.0AREA% (前例中值）26.2% 23.4% 20.6% 29.9% 100.1C12 280 0.100 28.0 C14 250 0.086 21.5 C16 220 0.076 16.7 C18 320 0.068 21.8 88.0使用归一化法分析脂肪酸甲酯未知样品No.202 外标法（ESTD）含量＝面积(pk) x RF(pk)优点校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到缺点进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正No.203 ESTD法计算举例面积值C12 C14 C16 C18 280 250 220 320RF0.100 0.086 0.076 0.068RF x AREA28.0ng 21.5ng 16.7ng 21.8ng使用外标法分析与前例相同的脂肪酸甲酯未知样品No.204 内标法（ISTD）面积(pk) x 含量(ISTD) x RF(pk,标样)含量(pk) ＝优点面积(ISTD) x RF(ISTD,标样)进样量不严格要求 只对欲分析的组分峰做校正 校正检测器的响应缺点必须加一个组分进到样品No.205 ISTD法计算举例面积值 C12 C14 C15 C16 280 250 310 320 RF（从前例中得到)0.100 0.086 0.081 0.076C183200.068单点校正，标样脂肪酸甲酯含C12, C14, C16和 C18四组分 各25ng，并加入一含量为 25ng 的内标物C15。No.206 ISTD法计算举例（接上页）面积值 C12 C14 280 250 RF x AREA （ESTD) 28.0ng 21.5ng ISTD结果 30.8ng 23.7ngC15C16 C18280220 32022.7ng16.7ng 21.8ng25ng18.4ng 24.0ng使用内标法分析与前例相同的脂肪酸甲酯未知样品No.207 选择内标物的标准1. 样品中不存在 2. 可迅速容易得到 3. 化学性质与样品相似 4. 与样品有相同的浓度范围 5. 不会与样品发生反应 6. 在感兴趣组分附近流出7. 可得到分离良好的、干净利落的峰8. 色谱性质稳定No.208 各种定量方法比较AREA%C12 C14 C16 C18 26.2% 23.4% 20.6% 29.9%NORM%31.8% 24.4% 19.0% 24.8%ESTD28.0ng 21.5ng 16.7ng 21.8ngISTD30.8ng 23.7ng 18.4ng 24.0ng使用四种分析方法分析脂肪酸甲酯样品，其中含C12, C14, C16 和C18四组分浓度未知No.209 定量方法总结优点AREA% 无需校正 进样量不严格要求缺点检测器的响应必须一致 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须被检测到 所有面积都须准确 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须测定 必须校正所有的峰NORM%进样量不严格要求ESTD校正检测器的响应 只对感兴趣峰做校正 无需所有峰都流出 无需所有峰都被检测到 其结果的报告可选择不同 的单位进样量不严格要求 只对感兴趣峰做校正 校正检测器的响应 其结果的报告可选择不同 的单位进样量必须准确 仪器需有很好稳定性ISTD必须在所有样品中加入 一个组分 样品和标样的准备工作 更加复杂No.210 外标百分比、内标百分比法*在 Sample Info. 中输入样品参数 Sample Amount 而且选择对应的 报告格式ESTD% 或ISTD%No.211 第十四章 建立校正表本章内容:? 建立校准曲线的过程。 ? 如何设置 calibration settings. ? 如何进行再校正(Re-Calibrate)。No.212 建立校准表的过程?配置系列标样*，然后逐一进样分析。 *系列标样浓度范围要包含未知样品浓度。 ?调用低浓度标样数据，优化谱图显示。 ?优化积分参数，获得满意的积分结果 后存贮积分事件到方法。 ?从Level 1开始做校正曲线。 ?逐个对每个标样进行优化谱图，优化 积分后，分别加入校正表。 ?检查校正曲线，把校正曲线存入方法。No.213 Signal Details选择、规定一个方法中要进行定量处理的信号No.214 Calibration SettingsNo.215 调用标样进行积分参数优化No.216 建立一级校正曲线No.217 校正表的建立填入: 化合物名称 浓度 选择: 参比峰 内标 内标标号#No.218 调用信号 -加入二级校正输入二级标样含量No.219 加入更多的级别输入对应标样含量线性相 关系数No.220 把校正表存入方法Save Table to MethodNo.221 再校正当校正曲线上的点发生偏移，需要对相应的浓度点做再校正。 再校正过程如下： ?进一针相应浓度的标样。 ?调用此数据文件。 ?在Calibration 菜单下，选择Recalibrate…, 选择需要再校正的级别，然后 选择如何再校正－Average或Replace。工作站自动进行再校正。No.222 第十五章 设定报告格式本章内容:? 如何定义一个报告类型 ? 报告文件的存贮方式 ? 报告类型选择No.223 定义报告From Data Analysis:No.224 定义报告: 报告输出目的地如果报告存贮成文件形式：.TXT - 只有报告文本存贮成 ASCII文件 .WMF - 每个报告的图形存贮成 meta file .DIF - 数据存贮成 EXCEL的DIF 格式(Data Interchange Format) 只适用于短报告格式 .CSV - 数据存贮成数据库文件 (Comma Separated Values), 适用于短报告.XLS - EXCEL报告格式 .HTM - 超文本格式, 可以使用Internet 浏览器浏览No.225 使用网络浏览器IE查看报告No.226 定量方法及报告格式定量方法? ?? ?百分比(Percent) 外标法和外标百分比法[External Standard(ESTD) and ESTD%] 归一化法(Norm%) 内标法及内标百分比法[Internal Standard(ISTD) and ISTD%]报告类型None Short Detail Header + Short GLP + Short GLP + Detail Short + Spectrum Detail + Spectrum Full Library Search Performance Performance + Noise Performance + Library Search Extended PerformanceNo.227 仪器参数曲线编辑No.228 报告格式存贮到方法No.229 打印报告打印报告No.230 报告工具打印预览 选择校正工具定义报告打印报告显示/隐藏当前色谱图No.231 第十六章 故障诊断与系统维护本章内容：诊断工具 ? 仪器详细信息 ? 进入logbooks ? EMF（Early Maintenance Feedback） ? 内置仪器诊断功能 ? 如何使用维护光盘?No.232 诊断界面（Diagnosis）No.233 仪器详细信息? 选择 Update Variables Display 显示仪器某一组件的详细信 息，例如firmware 版本号，仪器序列号等。 ? 选择 Show Module Details 显示仪器的结构图。No.234 进入LogbooksNo.235 Error LogbookNo.236 Runs LogbookNo.237 维护Logbook维护 logbook文件存贮在某一组件内，不是在计算机内。No.238 早期维护反馈（EMF）? 基于仪器的使用情况，计划仪器维 护的周期。 ? 根据以前的使用经验，输入需要维 护的限制值( limits) ? 当实际值达到需要维护的限制值时 ，EMF图标上的绿色对勾标记变成 黄色问号。No.239 分析问题诊断1. 从左侧下拉菜单中寻找 分析过程中您所遇到的 问题。 2. 在右侧的下拉菜单中， 选择可能的原因。 3. 按提示执行测试。 4. 使用Maintenance and Repair CD-ROM，提示 如何测试和维修。No.240 诊断测试开始测试 测试解释测试过程No.241 测试选择No.242 维护光盘维护光盘包括： ?多媒体、逐步的维护过程 ?查备件号。No.243 日常维护溶剂准备：过滤真空过滤装置 使用HPLC纯溶剂防止固体颗粒损伤仪器或柱头 使用小于 0.5?m过滤膜.有机物 - Teflon 水 - Nylon 66No.244 溶剂准备不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器 ，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤膜过滤溶剂去除微生物。???每两天更换或过滤溶剂。避免溶剂瓶直接日照。?No.245 溶剂脱气?目的 ?排除溶解在流动相中的氧气和氮气 ?脱气方法 ?He脱气 ?真空脱气 ?回流加热脱气 ?超声脱气No.246 溶剂信息避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：?卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。??能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。???含有强络合剂的溶液。四氯化碳和异丙醇或THF混合液。?No.247 NameAcetic AcidAcetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide溶剂的相溶性Immiscible MiscibleDioxanEthylacetateEthyl AlcoholDi-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane PentaneI-Propyl Alcohol Di-PropyletherTetrachloroethane TetrahydrofuranTolueneTrichloroethane Water XyleneNo.248 溶剂的紫外吸收截止波长Solvent Acetonitrile Water Cyclohexane Hexane Methanol Ethanol Diethyl Ether Dichloromethane Chloroform Carbon Tetrachloride Tetrahydrofuran Toluene UV Cutoff (nm) 190 190 195 200 210 210 220 220 240 265 280 (210) 280UV Cutoff is the wavelength at which absorbance equals 1 AU.No.249 初始化和平衡初始化HPLC泵柱平衡移走溶剂与系统中的气泡 使溶剂组成变化更容易确保分析结果再现性 对于反相柱使用5～10倍柱体积 流动相平衡色谱柱 No.250 预柱和保护柱从泵来的 流动相预柱进样口保护柱预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱分 析 柱至检测器No.251 色谱柱保护过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相No.252 HPLC柱测试对于一根新柱子，在流动相组成不变的情况下进行下述 实验并记录： 1. 记录理论塔板数N，以及: 柱子长度及内径. 测试样品名称及K’值. 固定相和流动相. 流动相流速. 进样量. 温度.2. 峰对称性包括苯酚、胺 3. 记录柱子压力.No.253 样品准备过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解No.254 The Good User下列优良常规实验操作能够最大限度降低维修费用：清洁的仪器、 流动相和样品; 进行必要的过滤。 ?保证溶剂的相溶性。 ?仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污染。 ?对仪器的维护和保养进行记录。?No.255 混合问题问题：+ 一个有紫外吸收的流动相与一个没有紫外吸收的流 动相动态混合产生噪音，增加静态混合器可以降低 这种噪音。 缺点: 增加了延迟体积静态混合器No.256 基线噪音可能的原因： 检测池脏检测池灯能量下降由泵引起的脉冲 检测器上的温度效应 检测池中有气泡通过Time (min.)No.257 基线噪音停泵是噪音是 否依然 存在否检测器?其它要考虑的问题 ▲是否改变了流动相的组成？ ▲是否改变了检测波长? ▲在你的仪器上使用的最后的流动相是什么? ▲流动相是否相溶? ▲流动相是否干净?泵或流动相?No.258 基线漂移梯度洗脱引起的 温度不稳定（RID） 流动相脏 柱子没有用流动相平衡 系统中污染物溢出No.259 鬼峰鬼峰－没有进样就有色谱峰出现。 原因－流动相脏20% - 100% MeOH梯度洗脱，没有进样No.260 柱外扩展增加柱外死体积用较短的、窄内径的毛细管连接进样器和色谱柱以及柱子和检测器。 确认连接管的接头都相互匹配。 使用死体积小的流动池 减小进样量No.261 峰形问题1? 双峰柱头塌陷正常双峰柱头塌陷或柱床运动。 泵头过滤芯(Frit)部分堵塞。 组份共流出No.262 2? 峰扩展所有峰都扩展 柱效降低或有柱塌陷 进样体积过大 流动相粘度大部分峰扩展 前一次分析样品的流出物 高分子量样品－蛋白质或聚合物No.263 3? 拖尾（拖尾因子&1.2）原因：部分峰拖尾二次保留效应 残留硅醇的相互作用小峰在大峰后洗脱出来正常 拖尾所有峰均拖尾柱外效应 柱子失效 柱头有污染物堆积 重金属反应正常拖尾No.264 拖尾因子A+B 2AA Bt=Excellent t = 1.0 - 1.05Acceptable t = 1.2Unacceptable t=2Awful t=4No.265 4? 前伸峰拖尾因子 & 0.9正常前伸原因： 柱子过载 小峰在大峰之前洗脱出来No.266 5? 负峰正常负峰原因 样品吸收比流动相吸收小。 溶解样品的溶剂通过柱子时平衡被破坏 RID中最常见No.267 压力问题压力问题压力过高压力过低压力波动No.268 压力测量压力过高? 柱子进口过滤芯被污染 ? PURGE阀过滤芯被污染 ? 色谱柱被污染 ? 连接管路，尤其是针座毛细管堵塞 ? 进样器旋转密封阀被堵塞使用此阀 分割系统? 进样针或针座被阻塞No.269 监测高压No.270 压力测量压力过低?溶剂进口过滤芯堵塞 连接管路泄漏或其它备件（泵密封垫）??溶剂或流速改变主动阀失灵 四元比例阀失灵溶剂进口 过滤芯???单向出口阀失灵色谱柱失效 (固定相)?No.271 监测低压No.272 压力波动? 溶剂进口过滤芯堵塞 ? 溶剂未脱气 ? 泵的密封垫老化溶剂进口 过滤芯? 出口单向阀失效 ? 主动阀失效*通常是：泵内有气泡No.273 监测压力变化No.274 监测压力变化监测压力波动是非常 快捷的方式来判断泵 的性能。此值应非常 稳定。No.275 附录：高级功能简介?序列功能简介?如何建立序列表 ?如何执行自动再校正 ?如何作循环再校正 ?数据文件如何命名 ?如何使用 Sequence Summary?DAD高级功能?如何优化色谱条件、提取色谱图 ?如何提取吸收光谱、创建谱库 ?如何进行峰纯度检测No.276 编辑序列进行自动分析1进入 Method and Run Control 界面。 2.从 Sequence 菜单，选择 New Sequence。 3 编辑 Sequence Parameters. 4.编辑Sequence Table. 5.选择Sequence Output. 6. 存贮序列。 7. 从RunControl菜单或从Sequence Table运行序列。No.277 编辑Sequence ParametersNo.278 序列数据文件格式自动进样格式: 003- 样品瓶号 (Vial Number) 01 序列号(Sequence Line) 01 进样次数(Replicate)前缀(Prefix) Prefix01 Prefix02, etc. 共8个字符。循环标样格式: C1-02001 C 表明使用循环标样 1 标样号 02 序列号 001 进样次数No.279 序列表中再校正No.280 循环再校正No.281 Bracketed 序列No.282 使用 Insert Vial Ranges填写校正表No.283 序列输出通过序列的Summary Report，您可以选择简 单的一页Summary报告 或复杂的Summary报告 ，包括交叉样品的统计 报告。No.284 编辑Sequence Summary标准或扩展统计No.285 扩展统计No.286 存贮序列文件存贮当前的序列No.287 运行序列?从RunControl菜单 选择Run Sequence 或按F6键 ?从Sequence Table运行No.288 部分序列及预览模式 Partial SequenceNo.289 自动进样器图标显示显示序列表中样品瓶的位置及序列表的运行状态， 单击此图标建立序列表。从 View菜单选择Sampling Diagram.No.290 DAD高级功能Display Options显示紫外谱图No.291 紫外谱图显示扣除背景的紫外谱图紫外谱图和参比谱图No.292 谱图处理工具谱图处理工具图标光谱选项选择色谱 图上任意 一点紫外 谱图选择第二个参比峰 选择峰顶 紫外谱图平均谱图 选择一组 紫外谱图选择第一个参比 选择峰纯度No.293 光谱选项 -紫外谱图No.294 光谱选项自动扣除背景 ? 平滑谱图 ? 使用导数谱图?No.295 紫外谱库: 原理选择某一色谱峰提出色谱峰上的吸收光谱打印出匹配系数Match: 998 光谱图与谱库中光谱比较250 W a v e l e n g t h (nm)300250300W a v e l e n g t h (nm)No.296 紫外谱库: 当前的局限性紫外谱图不特征。紫外谱图依赖于流动相的变化而变化。 未分离开的峰会给出错误结论。 重叠峰会给出错误结论。 没有商业谱库。No.297 影响谱图匹配的因素狭缝宽度 步径保留时间窗口吸收阈值 背景噪音 谱图噪音 导数谱图No.298 创建谱库No.299 输入谱库名称及描述No.300 提取化合物光谱图No.301 把谱图加入谱库No.302 波长表工作站自动 标出物质的最 大吸收和最小 吸收波长。No.303 谱图管理No.304 存贮谱库文件No.305 开始谱图检索 - 打开谱库可以打开自己工作站中的谱库， 也可以通过网络调用网上的谱库。No.306 检索模板No.307 检索谱图No.308 检索结果No.309 检索工具谱图处理工具 调用谱库 保存谱库编辑谱库标题信息打印谱库中谱图 退出当前谱库 编辑谱库中谱图 向谱库添加光谱 进行谱库检索 编辑谱库检索条件No.310 峰纯度在峰的洗脱过程中，通过比较所记录的吸收光谱图来评估 色谱峰是否包含不纯的物质。光谱处 理工具 图标峰纯度 检测No.311 峰纯度分析窗口阈值曲线模拟曲线Spectral Overlay3-D 显示 峰纯度信息 等高图No.312 峰纯度信息 -纯峰No.313 峰纯度信息 - 不纯峰No.314 附加信息 - 差谱差谱 - 纯峰差谱 - 不纯峰No.315 峰纯度性能影响峰纯度的因素:? ? ? ?化合物特征。 媒介化合物（溶剂）的吸收。 噪音大小。 化合物的波谱范围。优化条件:? ? ? ? ?使用光强度大的光源，对检测器进行常规维护。 选择合适的流动池和狭缝。 采集足够的数据点。 Peakwidth设置值合理。 样品浓度应在检测器的线性范围内。No.316 选择最大吸收波长等高图（Isoabsorbance Plot ） 吸收强度、波长和保留时间作为等吸收 的曲线图。No.317 等高图 （Isoabsorbance Plot）CursorQuick View Zoom Signal Spectrum黑色色谱图表 示当前波长下 的色谱图No.318 3D PlotNo.319 实验一：重新安装化学工作站如果您的化学工作站在操作过程中被误删某些执行程序或使用其它软件与化学工作站发生冲 突，致使化学工作站不能正常运行，那么就需要对化学工作站软件进行重新安装。重新安装化学工作站分四步进行： ▲拷贝：▲拷贝有用的文件－包括数据文件，方法文件及序列文件。 数据文件在 C:\HPCHEM\1\DATA子目录下； 方法文件在 C:\HPCHEM\1\METHODS子目录下； 序列文件在 C:\HPCHEM\1\SEQUENCE子目录下。 ▲拷贝Winnt子目录下win.ini文件。▲删除：▲删除HPCHEM子目录及子目录下所有文件。 ▲修改Winnt子目录下win.ini文件：删除win.ini文件中以[PCS], [PCS1] 为标题的 程序段。 ▲删除所有的（包括桌面、菜单中的）快捷方式。▲安装：▲运行光盘上的Setup.exe文件； ▲选择需要安装的软件并输入其序列号，执行安装。▲配置：▲选择仪器的工作状态； ▲配置仪器的IP地址。 No.320 修改win.ini文件修改完毕，存贮并退出win.ini编辑。No.321 安装软件把化学工作站软件CD-ROM盘放入光驱，用鼠标单击Start键，选择Run命令，在Run 对话框Open右侧空白栏中输入D:\setup.exe（假设D为光驱）后用鼠标单击OK键，进 行化学工作站的安装。?计算机启动工作站安装程序，进入工作站安装画面。单击Add/Change键，选择 需要安装的软件名称。No.322 ? 选择G2170AA LC ChemStation软件，单击右上方的Add键，然后在New License Number框输入G2170AA软件的登录号，再单击右侧的Add键； 如果有DAD检测器，在完成上述操作后，再选择G2180AA Spectra Evaluation软件，单击右上方的Add键，然后在 New License Number框输 入G2180AA软件登录号，再单击右侧的Add键。选择 需要 安装 的软 件右上方的 Add 键输入 登录 号右侧的 Add 键选择完毕，单击OK。No.323 ?单击Install键进行安装。仪器配置待软件安装完毕进行 仪器配置。 单击OK，确认GPIB 卡类型(旧的通讯方 式，现在很少使用).No.324 ? 选择 Configuration Editor界面中 Configure菜单下Instrument选项， 进入仪器选择界面。 VWD：选Modular LC System； DAD：选Modular 3D LC System。 ? 选择完毕，单击OK。Configuration Editor界面仪器选 择界面No.325 1）对于使用网络(LAN)连接进行通讯的仪器，需要选择LAN通讯方 式，然后单击Add键，在Device Address设置界面选择Identify by IP Address，在IP Address右侧框输入IP地址后，单击OKNo.326 2) 对于使用HP82341c卡进行通讯的仪器，需要选择GPIB通讯方式， 在GPIB Address右侧框输入GPIB地址，然后单击Add键。 ? GPIB地址的选择取决于计算机 与1100哪一个部件连接。例如： 计算机与四元泵连接通讯，则 GPIB地址选择22。有关1100 HPIB地址的详细信息见下表。? 旧的通讯方式，现在很少使用。No.327 3）无论以哪一种方式进行通讯，按1)或2)步骤设置完毕，存贮设置结 果后退出 Configuration Editor界面。 当安装完工作站，第一次启动Instrument 1 Online时，工作站自动 检测哪些部件已经成功地进行通讯。如果通讯成功，在左侧方框中被 检测到的部件图标为绿色。双击左侧方框中所有绿色图标后，绿色图 标移到右侧方框中。至此，工作站地安装彻底完成。左侧 方框右侧 方框No.328 实验二：方法编辑及数据采集?目的：掌握分析参数的设置，方法的编辑、存贮。熟悉一个样品分析 的全过程。?实验条件：?泵：四元泵、二元泵 ?进样器：自动进样器、手动进样器 ?柱温箱：（可选组件） ?检测器：可变波长检测器VWD、二极管阵列检测器DAD ?色谱柱：ODS 0.5um, 100×4.6mm ?流动相比例：A.水15％，B.甲醇85％ ?进样量: 10?L ?柱温：Not control ?检测波长：254nm ?流动相流量：0.5ml/minNo.329 ? 实验步骤? ? ? ? 打开计算机，进入Windows操作系统。 开启1100各部件电源开关。 待1100各部件自检完毕，且通讯成功后，在计算机上启动Online化学工作站 在Method & Run Control界面下，单击Method 菜单，选择菜单中Edit Entire Method…进入Method 编辑状态。No.330 ?单击OK进入Method Information: Instrument 1 编辑界面，在Method Comments下方框中输入对Method 的描述。输入完毕单击OK。?在泵参数设置界面，按要求输入泵参数。设置完毕，单击OK。No.331 ?在自动进样器参数设置界面，选择标准进样方式(Standard Injection) ，并输入进样量。输入完毕，单击OK。（如果没有自动进样器，此 界面不会出现）。?检测器参数设置。?DAD参数设置：输入样品检测波长、样品谱带宽度、参比波 长、 参比谱带宽度及响应时间(PeakWidth)。?VWD参数设置：输入样品检测波长及响应时间(PeakWidth)。No.332 DAD参 数设置 请选中 StoreVWD 参数 设置No.333 ?在柱温箱参数设置界面，选择Not Controlled。然后单击OK。?在Signal Details: Instrument 1编辑界面，单击OK。?在积分参数设置界面，单击OK。?在Specify Report: Instrument 1编辑界面，单击OK。 以上三项均属数据分析参数，在此实验中均不设置。No.334 ?在运行时间表中(Run Time Checklist)编辑界面，选择Data Acquisation 和Standard Data Analysis。参数选择完毕，单击OK，整个分析方法编辑完成。 ?方法存贮。方法编辑完毕，单击Method菜单，选择Save Method As， 输入存盘方法文件名。No.335 ?运行样品?打开Purge阀，进行系统初始化。 ?运行Instrument菜单下System On命令启动系统。(或单击on图标)?待废液管中无气泡流出，降低流量，然后关闭purge阀。No.336 ?单击View菜单，选择Online Signals下Signal Window 1，打开 信号监控窗口。No.337 ?单击信号监控窗口的Change键，进入信号选择窗口，选择所要监 控的信号后，单击Add键，然后单击OK键。No.338 ?待基线稳定之后，单击信号窗口的Balance键，进行基线归零。No.339 ?单击RunControl菜单，选择Sample Info…, 进行样品信息编辑。 注意：样品瓶号不可空缺，否则直接运行空白测试。?进样分析：?对于自动进样器，单击Run Method； ?对于手动进样器，在Load位置注射进样后，扳动手动进样阀至Inject位 置，工作站开始自动采集数据。No.340 实验三 外标法定量?目的：通过使用ESTD1, ESTD3二个数据编辑外标二级校正表，掌握色谱数据的 调用、积分参数的优化、谱图显示的优化，熟悉外标校正曲线编辑的全过程。 ?分析参数： ?样品数据：(浓度单位为ppm) Solvent ESTD1:(标样)--------ESTD3:(标样)--------ESTD5:(未知)--------?样品谱图: C9 9.9 19.8 ? C10 10 20.4 ? C11 10.02 20.6 ?No.341 ?实验步骤： ?一级校正表的建立 ?在Data Analysis界面下，调用低浓度标样数据HPCHEM\1\Data\ESTD1No.342 ?优化谱图显示：打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进 入Signal Option 编辑框，在Range选择选择AutoScale。No.343 ?优化积分 ： ?在Data Analysis界面下，单击Integration菜单，选择Integration Events…， 编 辑积分事件。No.344 ?在积分事件表中，输入合适的积分参数。然后单击积分事件表左上角图标。No.345 ?建立一级校正表：单击Calibration选择New Calibration Table。 ?直接单击OK, 选择 Automatic Setup.No.346 ?在校正表中输入化合物名称及浓度。在输入浓度后，相应化合物的校正曲线会 显示出来。?单击OK键，工作站会提示您是否要删除0浓度行？单击Yes。No.347 ?二级校正表的建立 ?调用第二个标样数据文件HPCHEM\1\DATA\ESTD3 ?按照一级校正表建立中所涉及的内容，优化谱图显示，优化积分参数。?单击Calibration菜单，选择Add Level，编辑二级校正表。No.348 ?在校正表中，输入第二个标样的浓度。输入浓度后，相应化合物的校正曲线会 显示出来。单击OK，完成二级校正表的编辑。No.349 ?校正表参数设定：单击Calibration菜单，选择Calibration Setting,在Calibration Setting编辑框输入浓度单位、时间窗口、 校正曲线类型。No.350 ?报告的设定：单击Report菜单，选择Specify Report，进入Specify Report编辑框 ，输入打印目的地，选择定量方法ESTD。No.351 ?未知样品的定量 ?调用样品数据文件：HPCHEM\1\DATA\ESTD5。 ?优化谱图显示，优化积分参数 。?选择Report菜单下Print Report命令，打印定量结果。存贮分析方法！No.352 External Standard Report============================================ Sorted By : Signal Sunday, October 01, :28Calib. Data Modified : PM Multiplier Dilution : :1.0Signal 1: FID1 A,问题：RetTime Type [min] Area Amt/Area Amount Grp Name [ppm]-------|------|----------|----------|----------|--|------------------1. 如何存贮校正表 及校正曲线？2.317 PV T 1..2.23882 C93.216 PV T 1..3.9.662 PV T 1..3.62065 C11 Totals : 118.805162. 此二级校正曲线 存在什么问题？如 何解决？No.353 实验四 内标法定量?目的：通过使用ISTD1, ISTD5二个数据编辑内标二级校正表，掌握色谱数据的 调用、积分参数的优化、谱图显示的优化，熟悉内标校正曲线编辑的全过程。 ?分析参数： ?样品数据：(浓度单位为ng/ul) Solvent ISTD1:(标样) --------ISTD3:(未知) --------ISTD5:(标样) --------?样品谱图: 内标 C9 9.9 ? 49.8 C10(内标) 10 9.9 10.05 C11 10.02 ? 50.3No.354 ?实验步骤： ?一级校正表的建立 ?在Data Analysis界面下，调用低浓度标样数据HPCHEM\1\Data\ISTD1No.355 ?优化谱图显示：打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进 入Signal Option 编辑框，在Range选择选择AutoScale。No.356 ?优化积分 ： ?在Data Analysis界面下，单击Integration菜单，选择Integration Events…， 编 辑积分事件。No.357 ?在积分事件表中，输入合适的积分参数。然后单击积分事件表左上角图标。No.358 ?建立一级校正表：单击Calibration选择New Calibration Table。 ?直接单击OK, 选择 Automatic Setup.No.359 ?在校正表中输入化合物名称及浓度,并选择C10为内标物。单击OK后，工作站会 提示ISTD的信息，单击OK确认。?单击OK键，工作站会提示您是否要删除0浓度行？单击Yes。No.360 ?二级校正表的建立 ?调用第二个标样数据文件HPCHEM\1\DATA\ISTD5 ?按照一级校正表建立中所涉及的内容，优化谱图显示，优化积分参数。?单击Calibration菜单，选择Add Level，编辑二级校正表。No.361 ?在校正表中，输入第二个标样的浓度。单击OK，完成二级校正表的编辑。No.362 ?校正表参数设定：单击Calibration菜单，选择Calibration Setting,在Calibration Setting编辑框输入浓度单位、时间窗口、样品内标浓度、 校正曲线类型。 样 品 内 标 浓 度 输 入No.363 ?报告的设定：单击Report菜单，选择Specify Report，进入Specify Report编辑框 ，输入打印目的地，选择定量方法ISTD。No.364 ?未知样品的定量 ?调用样品数据文件：HPCHEM\1\DATA\ISTD3。 ?优化谱图显示，优化积分参数 。?选择Report菜单下Print Report命令，打印定量结果。存贮分析方法！No.365 Internal Standard Report=================================================== Sorted By : Signal Calib. Data Modified: Tuesday, October 03, 2000 Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Sample ISTD Information: ISTD ISTD Amount Name # [ng/ul] ----|-------------|------------------------1 9.90000 C10 Signal 1: FID1 A, RetTime [min] Type Area Amt/Area ratio Amount [ng/ul] Grp Name问题：-------|------|----------|----------|----------|--|2.325 PV T 6..00 1.95 9.86 51.2 C113.223 PV T I 2..664 PV T 6.16614e41. 如果一个样品既 做内标定量，又作 外标定量，如何实 施？2.如何选择多个内 标？No.366Totals without ISTD(s) :======================================================== *** End of Report ***
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agilent HPLC化学工作站操作培训
Agilent 1100 化学工作站 操作培训日 Agilent 1100 化学工作站培训日程安排第一天 上午： 1 2 3 下午：1 欢迎，相互介绍 液相色谱基础 HPLC仪器工作原理 Agilent 1100 硬件的结构及特点 （真空脱气机、泵、自动进样器、检测器） 2 Windows操作系统简介 3 化学工作站的重新安装、配置及启动 4 练习（实验一）第二天上午：1 化学工作站View菜单介绍 2 方法的编辑、修改、存贮及运行 3 Agilent 各部件采集参数设置 4 填写样品信息表、进样分析（实验二） 下午：1 数据处理参数设置 （谱图优化、积分优化） 2 练习 3 谱图处理、手动积分No.2 第三天上午：1 各种定量方法原理及其优缺点 2 建立多级外标校正曲线，用外标法定量 3 练习（实验三） 下午：1 建立多级内标校正曲线，用内标法定量 2 再校正、设定报告类型 3 练习（实验四） 4 高级功能简介（序列、DAD光谱功能……） 上午：1 系统日常维护和保养 2 工作站故障诊断功能的应用 3 Agilent 1100泵的维护 （拆泵头，更换泵头消耗品） 4 Agilent 1100检测器的维护（VWD、DAD易耗品的 更换，清洗流通池） 5 练习 结业午餐第四天下午：1 考试 2 发结业证 3 自由练习、讨论No.3 第一章 色谱基础本章内容：?液相色谱发展史?液相色谱的基本概念 ?影响峰形扩展的因素No.4 历史回顾1906 - Mikhail Semenovich Tswett ()碳酸钙吸附剂 石油醚 1940‘s - 分配色谱和纸色谱 1950‘s - 气相, 薄层，凝胶过滤色谱 梯度洗脱色谱 1960‘s - 商业高效液相色谱.HC3CH2CH 3N Mg NNCH3N CH 30 0 0 0 0CH 3CH3CH3CH3M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)No.5 柱色谱玻璃柱重力 洗脱硅胶 氧化铝 纤维素 糖类粉末装载 样品装载 溶剂滤网Volume (mL) Time (hr)150 4.0100 3.0 2.0501.010No.6 高效液相色谱 (HPLC)进样口 混合器 泵 色谱图 色谱柱检测器溶剂No.7 液相色谱类型Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak BasesModeStationary PhaseMobile PhaseReversed-PhaseC-18, C-8, C-4, C-2Water/Organic ModifiersIonics, Bases, AcidsIon-PairC-18, C-8Water/Organic Ion-Pair ReagentCompounds Insoluble in Water, Organic IsomersNormal-PhaseSilica, Amino, Cyano DiolOrganicsIonics Inorganic IonsIon ExchangeAnion or Cation Exchange Resin Polystyrene SilicaAqueous/Buffer Counter IonHigh MW Compounds PolymersSize ExclusionGel FiltrationAqueous Gel PermeationOrganicNo.8 色谱参数 －定性和定量tR(B)tR(A)Detector Responset0Inject A BW TimeAWBt R = 保留时间 t 0 = 死时间W = 峰底宽度R=2K’=tR(B) - tR(A)WA + WB= 1.176tR(B) - tR(A)W1/2A + W1/2BtR-t0 t0No.9 不同R值的峰重叠0.40.50.60.70.81.001.25R=1.5可以得到基线分离No.10 影响R值的因素R=Δt W=1/4Nxα- 1 α选择性xk' 1 + k'柱效容量因子No.11 容量因子各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的 变化增大或缩小溶剂洗脱强度弱 mA U 60% Acetonitrile 40% Water300 100 2 4 Time (min.) 6 8 10增加流动相的洗脱强度，降低了洗脱物的容量因子溶剂洗脱强度强 mA U
2 4 Time (min.) 6 8 1080% Acetonitrile 20% Water对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2 到2/3。No.12 分离选择性(α)α= k' Bk' AABA BA B231212t0=1α=k' B k' A=1.64 1.58=1.04α=1.15 0.85= 1.35α=0.95 0.63=1.50改用不同的流动相 改变流动相的组成 改变流动相pH值 改变柱温 应用特殊的化学效应 改变固定相改变分离选择性α的方法No.13 温度对分离选择性α的影响40 ℃60℃05 Time in Minutes10No.14 柱效Detector Response Inject低柱效高柱效TimeNo.15 计算柱效tRInjectW 1/2W TimeBN = 16t R WB L N2 = 5.54t R W 1/22HETP =No.16 扩散范德姆特方程 The Van Deemter EquationA = 涡流扩散 B = 自由分子扩散 C = 传质阻力HETPB uA线速度No.17 扩散A = 涡流扩散――多径扩散仔细填充柱子 使用均一的载体初始 带宽H E T PA线速度最终 带宽No.18 扩散B = 自由分子扩散――纵向扩散在液相中影响小 在低流速中影响大H E T PB?线速度No.19 扩散C = 传质阻力 在低流速下可以降低传质阻力 使用小颗粒载体可以降低传质阻力H E T P流动相线速度固定相滞流的 流动相No.20 扩散范德姆特方程 The Van Deemter EquationA = 涡流扩散 B = 自由分子扩散 C = 传质阻力HETPB uA线速度No.21 柱外效应I. 样品体积 II. 连接管路的体积 III. 色谱柱进口设计 IV. 色谱柱出口设计 V. 检测池体积 ( & 10 ?L )VI.降低输出回路响应时间No.22 不同分离度比较Poor efficiency Moderate selectivity R=1Poor efficiency Good selectivityR = 1.5Excellent efficiency Poor selectivity R = 0.5Excellent efficiency Moderate selectivityR=4No.23 如何提高分离度通过下述方法增加保留时间:选择合适的分离参数 增加色谱柱长度 增加固定相浓度通过下述方法降低谱带宽度:使用均一的载体 仔细填充柱子 选择粒度小的载体 优化流速 减小进样量 降低系统死体积 降低输出回路响应时间No.24 第二章 HPLC 仪器工作原理本章内容：?往复活塞泵的结构及工作原理 ?手动进样器（六通阀）结构及工作原理 ?常见检测器检测原理No.25 溶剂传输系统往复活塞泵(单向阀)Gold Seal Sapphire Insert Ruby Ball Spring InsertNo.26 溶剂传输系统减小流量脉冲－并联柱塞泵P 单向阀 B A A B 柱塞A前进Single Piston Delivery PCombined Delivery柱塞B后退相消干扰 通常也需要阻尼器 增加了单向阀的使用数量No.27 溶剂传输系统消除流量脉冲－串联柱塞泵单向阀PAgilent 1100 Series Pumps: Solvent Compressibility CompensationPiston Displacement (l)0System Pressure&0System Pressure=0脉冲阻尼器100One Piston Cycle TIME减少了单向阀用量 需要阻尼器 压缩因子补偿w/o compensation with compensationFor internal use only 11No.28 手动进样器－六通阀LoadSample Syringe To WasteInjectTo WasteTo Column Sample Loop (Fixed Volume) To Column From PumpFrom PumpNo.29 检测器使用统计43.0%UV-VIS DAD Fluorescence Refractive Index 22.0% 4.0% Electrochemical 1.0% 5.0% 7.0% 10.0% 8.0% Conductivity Mass spec OthersNo.30 Necessity for More than One DetectorSensitivityUV-signalWL 241/394WL 270/388WL 248/411WL 302/420WL 247/504FluorescenceSolv.: H2O/CH3OH= 10:90 PAH's Col.: Sup.LC-PAH 150x4.6No.31 Necessity for More than One DetectorSelectivityFlecainide in SerumUV signal FL signalTherapeutic concentration: 1.8mg/l, 20ul injected UV and fluorescence signalNo.32 需要多个检测器Qualitative InformationChlortoluron ? Atrazine ?Take peak spectrum (UV)Take peak spectrum (MS)200 58 215 44 68 96 104120172 132140138 158160 180 200 220200Wavelength (nm)2506080100Mass/ChargeNo.33 紫外－可见检测器根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。Detector Cell Io C b ILogI0 = 入射光强度 I = 透射光强度 A = 吸光度I0 I= A = abca = 摩尔吸光系数 b = 检测池长度c = 溶质浓度No.34 发色团吸收波长ChromophoreAmine Ethylene Ketone Ester Aldehyde Carboxyl Nitro Phenyl NaphthylStructure- NH 2max(nm)195 190 195 205 210 200-210 310 202, 255 220, 275-C=CC=O - COOR - CHO - COOH - NO2-max= wavelength of absorption maximumNo.35 Instrumentation - Absorbance DetectorsVariable Wavelength (UV/Visible)Slits Light Source Detector Elementflow Cell Mechanical Grating MonochromatorNo.36 Instrumentation - Absorbance DetectorsPhotodiode Array (UV/Visible) Light Source Holographic GratingSlitsLensesFlow CellPhotodiode ArrayNo.37 DAD - Peak PurityGraphical and Numerical ResultsSpectraPurity Match 764Purity Match 999200Wavelength (nm)400200Wavelength (nm)400Signalimpurepure7.67.88.0Time (min.)8.28.6No.38 InstrumentationFluorescence DetectorsGrating - Grating Flow CellExcitation Light SourceEmission Variable Excitation and Emission WavelengthsPhotomultiplier TubeNo.39 InstrumentationRefractive Index DetectorsBeam Deflection Fresnel Prism Laser InterferometerReference CellSample CellPhotodiodes Sample Reference Sample ReferenceNo.40 第三章 固定相结构本章内容：?固定相载体结构 ?正相色谱固定相 ?键合相色谱固定相No.41 Particles of Column Packings50?m Large Porous Particles30?m 2?m Active Surface Pellicular Beads3-10?m MicroparticulatesNo.42 Typical Column Packing SupportsOH Si O Silica Gel SurfaceOH O Si OOH Si Si O O O Si OHChemically Modified Silica Gel Pores Si Si Si SiCH 3 Si - O - Si - (CH2)17CH3 CH 3SiNo.43 正相 HPLC极性固定相 有机流动相传统 目前硅胶 氧化铝 氰基 二醇基吸附色谱键合相氨基适用于: 同分异构体的分离. 在有机/水流动相中不溶化合物的分离. 适用于中等极性化合物分离.No.44 吸附色谱保留机理O H Si O O H O R O Si O Si O O H机理 H-键 偶极矩 -键 溶质顶替等量的溶剂 固定相 硅胶 氯化铝H O R流动相 有机溶剂No.45 吸附色谱中的保留small k'saturated hydrocarbons olefins aromatic hydrocarbons, organic halides sulfides ethers nitro-compounds esters, aldehydes, ketones alcohols, amines sulfones sulfoxides amides carboxylic acids非极性 不保留large k'极性 被强烈 吸附No.46 硅胶柱和氧化铝柱的缺点容易脱尾 样品被催化分解 不易梯度洗脱含水量要控制No.47 正相色谱键合相SiOCH 3 CH 2 Si CH 3DiolCH OH CH 2 OHCyanoSi OCH 3 Si (CH 2) CH 3nCNAmineSi O CH 3 ( CH 2 ) n Si CH 3 CH 2 NH 2No.48 键合相柱优点固定相不易被流动相洗脱 无需饱和色谱柱 非常容易进行梯度洗脱 柱子平衡非常快 使用极性范围宽 选择性唯一 柱容量大 溶质不易污染柱子No.49 第四章 Agilent 1100 系统硬件概观G1310A G1322A G1314AIsocratic pump G1312AVacuum degasser G1313AVariable wavelength detector G1315ABinary pump G1354AAutosampler G1316ADiode-array detector G1323APlus, Manual InjectorQuaternary pumpThermostatted column compartmentControl moduleNo.50 堆积配置? ?优化流路减小死体积 流路自上而下溶剂柜 脱气机 泵自动进样器柱温 箱手持控制器检测器No.51 连线每个部分有独立的电源 1100各部件均由CAN线连接 检测器与化学工作站之间用 LAN线连接 (或用HP-IB连接) 脱气机与泵之间用遥控线连接 (错误信号输出) BCD板用于外设和读取样品瓶数 量? ? ??外设 (x4)?HP-IBNo.52 指示灯状态6种LED仪器状态：Off (power off) Ready (power on) Not Ready Run Error ResidentBlack Black Yellow Green Red Yellow blinking仪器LED 状态显示Blink电源开关显示No.53 FittingsSwagelokWaters0.090 in.0.130 in.ParkerRheodyne0.170 in. 0.090 in.ValcoUptight0.090 in.0.080 in.Troubleshooting LC Fittings, Part II. LC/GC Magazine 6:788 (1988)J. W. Dolan and P. Upchurch.No.54 HP Capillary Color CodingColor Red Green Bluei.d. 0.12 mm 0.17 mm 0.25 mmNo.55 第五章 Agilent 1100 泵和在线脱气机Agilent 1100系列泵,G1310A, G1311A, G1312A, G1354A 和Agilent 1100 系列在线真空脱气装 置(G1322A)No.56 Agilent 1100系列真空脱气机性能 /用途 ?与He脱气相比，更方便，更节省费用。 ?高性能脱气，避免了烦琐的操作，提高 仪器稳定性。 ?内部延迟体积小，便于快速进行溶剂切 换。 ?4通路系统，操作灵活。 ?与1100其它组件堆积在一起，用遥控线 连接，用于传输错误信号。建议 ... ?低压混合进行梯度洗脱，提高 泵的可靠性能。 ?提高泵在低流速下的操作性能 ?用于需要脱氧的检测器No.57 The HP 1100 Vacuum Degasser (G1322A)SolventABCDPumpNo.58 Agilent 1100 系列 On-line Degasser 设计控制组件 真空室电磁阀ABC真空泵DNo.59 在线真空脱气机工作原理1 ml Solenoid valveNo.60 HP 1100 Series On-line Degasser: Influence on Detector BaselineSolvent: UV signal: 210 nmno degassingAbsorbencyhelium degassingHP on-line degassing123456789Time (min)No.61 Agilent 1100在线真空脱气机对保留时间在现性的影响 溶解酵素分析mAU60 50 40 30 20 10 0First analysisLast analysis after 30 hoursHelium Degassing242526272829mAU 60 50 40 30 20 10 0 24 25First analysisLast analysis after 30 hoursOn-line Vacuum Degassing29262728No.62 低流速下Online-Degassing 对保留时间和峰面积的影响Column Column Dimension ODS Hypersil, 5?m 2.1×100mmSampleMixture of CaffeinePrimidone, PhenacetinMobile Phase2 6 1 0m i nFlow15% Acetonitrile/Water 0.22ml/min 40? C 220/8 Ref450/80nmRatew i t h o u t d e g a s s i n gTemperature Detection1 . 2 1R e t e n t i o n P e a k a r e a s0 . 8 t i m e s 0 . 6%RSD2 6 1 0m i n0 . 4 0 . 2 0w i t h d e g a s s i n gw i t h o u t w i t h w i t h o u t w i t h d e g a s s i n gNo.63 Agilent 1100系列单元泵－G1310A特征/用途 ?流量范围宽，用途广泛：0.5 ~ 10 ml/min ?双柱塞，可变冲程，以及阻尼器可以减小流量脉冲。 ?改进的阀系统可以延长使用寿命，降低维修成本。 ?容易维护和维修。 ?直接与溶剂瓶，清洗阀和管路连接，便于快速启动。 ?可以升级至四元泵。建议 ... ?常规质量控制分析 ?简单混合物的分析 ?用于体积排阻色谱 ?半制备工作加真空脱气机,?流量范围可扩展至： 0.2 - 10 ml/minNo.64 Agilent 1100系列单元泵 (G1310A)瓶头组件溶剂瓶泵头溶剂柜 阻尼器1. 单向阀 2. 冲洗阀 3. 主动阀泵No.65 单元泵工作原理DamperOutlet Ball ValvePurge valveActive Inlet ValveSealPistonBall Screw Drive GearAuthoring Division Name File Name Security Notice (if required)Motor with EncoderNo.66 泵头 - 单元/四元泵Pump head screwsLock ScrewNo.67 泵头结构图5Holding/Lock Screw (PEEK)Seal23 4617Seal:No.68 阀－ 单元泵/四元泵new styleCartridge 8Frit7old style3142Outlet Ball Valve5Purge Valve6Active Inlet Valve(common to all except 1050)PTFE Frit: No.69 Agilent 1100系列密封垫冲洗－Seal Wash ( 可选)Washer?Seal?Support seal assembly?当流动相中盐浓度&0.01M时，使用 Seal Wash可以减小密封垫的磨损。 对于Agilent 1100系列泵为可选件 。 用10%异丙醇水溶液冲洗No.70 带有Seal Wash的泵头结构图3 21No.71 Agilent 1100系列四元泵－G1354A; 真空脱气机为标准配置!建议 ... ?使用2，4，8mm内径的柱子 ?流量范围从 0.2 到 10 ml/min ?应用于研究和常规分析特征/优点 ?四通路/低压混合能灵活地进行恒梯度或梯 度洗脱。 ?无需消耗昂贵的He而能进行高性能真空脱 气。 ?自动冲程调节，混合非常均匀，降低基线 噪音。 ?对于高盐流动相，可选择Seal Wash清洗密 封垫。No.72 Agilent 1100系列四元泵－G1354A 包括真空脱气机溶剂柜真空脱气机 G1322A四元泵 G1311ANo.73 四元泵工作原理Vacuum Chamberfrom solvent bottlesDamperMCGV AIV OBV 比例阀 主动阀 单向阀Purge Valve AIV OBV MCGVAuthoring Division Name File Name Security Notice (if required)to injection deviceWasteNo.74 Agilent 1100系列二元泵－G1312A建议 ... ?使用4mm内径柱子 ?流量范围从 0.5 到 5 ml/min优点/特征 ?高压混合，无需脱气。 ?对于有强紫外吸收的流动相，使用静态混合器可以降低基线噪音。 ?可以选择溶剂切换阀自动进行溶剂切换 ?对于高盐流动相，可选择Seal Wash清洗Seal。增加真空脱气机, ?流量范围可扩展至 0.05 ～ 5 ml/min ?推荐使用1，2，4mm内径的柱子。No.75 二元泵工作原理Purge valveDamperMixerWaste Inlet valveOutlet valve Inlet valveOutlet valveABNo.76 带有溶剂切换阀的二元泵DamperMixer Restriction CapillaryMixing Capillary ClampAA1 A2B1 B2BSolvent Selection ValveNo.77 阀: 二元泵new styleCartridgeSieveold styleOutlet Ball Valve Active Inlet Valve(common to all except 1050) (unique to the binary pump due to the presence of the sieve)Purge Valve(common to all)No.78 HP 1100 Series Pumping Systems Flow Ranges OverviewG1312A G1322A G1354A G1312A G1310A G1322ABinary pump Quaternary pump Binary pump with degasser0.05-5 ml/min0.2-10 ml/min0.5-5 ml/minG1310A0.2-10 ml/minIsocratic pump with degasserIsocratic pump0.5-10 ml/minNo.79 系统延迟体积的比较(单位：?L)1090泵 不带混合器 带混合器 300-500 0 混合器 自动进样器 标准 旁路 V (loop) N/A 4.1 or 8.2 0 327 + V (inj) 8 15 0 300 + V (inj) 6.2 3 or 6 0 300 + V (inj) 6.2 3 or 6 01050800-1100 n/a n/a1100 四元泵800-1100 n/a n/a1100 二元泵180-480 600-900 420柱温箱 标准旁路 min Range Max Range 304-504 42-06189-489 906-1206No.80 第六章 Agilent 1100 自动进样器0.6 0.5 0.4 0.3Precision0.2 0.1 0102550100No.81 Agilent 1100 系列自动进样 器性能/优点进样体积重复性高 (典型& 0.5% RSD) ? 进样动态范围宽 ? 连续冲洗流路并有洗针功能－降低样品残留 ?所有驱动均采用电子驱动 ? 可以容纳不同规格的样品瓶 ?灵活的进样程序编制可以进行样品前处理 （例如柱前衍生） ?使用旁路可以降低延迟体积?推荐 … 进样体积从0.1? L到1.8 ml ? 最多可容纳100个样品瓶 ? 自动样品前处理?No.82 Agilent 1100 系列自动进样器扩展进样范围选择性能/优点推荐 …??? ?非常灵活的扩展动态范围 进样量准确 可以从现有系统升级? ?大体积进样 标准和带加热的自动进样器 新的或现有系统No.83 自动进样器管路连接From pumpTo column compartmentNo.84 Agilent 1100 系列自动进样器结构100 x 2ml 样品盘计量泵40 x 2ml 样品盘 样品管带机器手 的传输臂进样阀 样品盘 15 x 6ml 样品盘No.85 标准进样过程 ...Metering device Sampling unit From pump To column 6-port valve To waste准备位置调用样品瓶 吸样品进样和运行位置No.86 不同进样体积下的峰面积精度RSD (%)0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 1 3 5 7 9 10 25 50 100Injection Vol. (? l)No.87 Agilent 1100 系列自动进样器进样测试Repetitive 1 ? l injections from 10 ? l samplemAU 100 80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 30 35 min#1#5#8#10No.88 Agilent 1100 系列自动进样器进样线性Area Counts2000Correlation: 0.9999951000020406080100Injection Volume (? L)No.89 Agilent 1100 系列自动进样器 样品容量? ? ? ??进样量? ? ?100 x 2 ml vials in 1 tray 40 x 2 ml vials in 1/2 tray 15 x 6 ml vials in 1/2 tray 117 x 2 ml vials with external tray Micro vials for small volumes Standard: 0.1-100 ?l Up to 1.8 ml using multi draw option Expanded injection range: 0.1-900 ?l 5-100 ?l 1-5 ?l typically &0.5% RSD typically &1% RSD typically &0.1% typically &0.05%精度? ?残留? ?Without needle wash With needle wash延迟体积? ?Standard 300 ?l+injection volume In bypass mode 6.2 ?lNo.90 Agilent 1100系列自动进样器特殊功能?洗针 把样品残留降低到最小限度 多次吸液 用于进样量大于100?L 旁路 减小延迟体积 进样程序 非常灵活地执行进样系列???No.91 Impact of Needle Wash on CarryOver with Capped and Uncapped Wash VialsWithout needle wash With needle wash, wash vial uncapped With needle wash, wash vial capped0.35 0.30.35 0.3Carry -over (%)PrimidoneCarry- over (%)0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.1 0.50.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.1 0.5Phenacetine1515Injection volume ( ?L)Injection volume ( ?L)No.92 使用洗针程序可以降低样品残留mAU 4Sample:0.01 M 咖啡因, 普里米酮 , 非那西汀 1? LInjection volume:样品残留峰Blank injection (1? L) with needle wash 0 Blank injection (1? L) without needle wash 5 10 minNo.93 带有多次吸样装置的自动进样器?Injection range: 0.1 - 900?L Up to 1800?L with Multi-draw kit?900?L needle900 ?l loop extension900? L metering device SamplingunitFrom pump To columnloop extension for multi-draw To wasteNo.94 Agilent 1100 自动进样器进样程序? ?用于样品衍生或样品前处理 进样量从 0.5 到 5 ? lSample Reagent Metering deviceSampling unitFrom pump To column使用多次吸样 可以扩展进样量To wasteNo.95 Agilent 1100 系列带加热的自动进样器性能/优点半导体控制，可以非常方便、准确的升温和降温 ? 控温范围: 4- 40℃(室温为25℃) ? 可容纳100个样品瓶 (冷却) ?可更换样品盘?推荐 ...对于热依赖性的样品使用 ? (生化)制药行业 ? 临床实验室?No.96 自动进样器加热原理热交换器室温空气入口加热 / 冷却部件半导体部件热空气出口No.97 自动进样器测试功能?维护情况:C更换针C更换针座C更换机器臂对机器臂定位 ? 分步命令?No.98 第七章 Agilent 1100 柱温箱TCCNo.99 柱温箱的特征及优点推荐 ... ?温度控制范围： 低于室温10℃～80℃ ?保留时间的再现性需要稳定 的温度 ?如果需要在高于或低于室温 进行分离操作时，需要使用 柱温箱特征/优点 ?大空间，可以容纳三根30cm长色谱柱 ?更换柱子非常方便 ?降温非常方便 ?安装柱识别可以记录进样次数 ?使用切换阀可以进行柱切换(可选) ?两个单独的加热区可以分别控制温度 ?可以进行程序升温 ?内部死体积小(左侧3? L，右侧6? L)No.100 HP 1100 柱 恒 温 与 普 通 柱 温 箱 比 较71.30 71.20 71.10 retention time 71.00 70.90 70.80 70.70 70.60 70.50 70.40 1 2 3 4 Hours 5 6 conventional column oven 7 8 9 10day nightHP1100 column thermostat with Peltier heating and coolingdayColumn:250 x 1 mm Vydac TP 218; Eluent: Water/Acetonitrile + TFA RT fluctuations of peptide peak over a sequence of 10 consecutive tryptic myoglobin maps.No.101 室温下的柱温控制性能mAU30Environmental Application4 3 1 2 6 5 78 9 12 13P e a k C o m p o u n d% R S D o f R T 1 N a p h t h a l e n e0 . 1 2 2A c e n a p h t h e n e 0 . 1 7 3 F l u o r e n e 0 . 0 9 4P h e n a n t h r e n e 0 . 0 9 5 A n t h r a c e n e0 . 0 8 6F l u o r a n t h e n e 0 . 0 8 7 P y r e n e 0 . 0 8 8B e n z ( a ) a n t h r a c 0 . 0 9 9 C h r y s e n e 0 . 1 0 1 0B e n z o ( b ) f l u o r . 0 . 1 0 1 1B e n z o ( k ) f l u o r . 0 . 1 025 min2510 11 14 15201510505101520Sample Column Column Temp Flow rate Mobile Phase GradientPNA EPA Standard 250 x 2.1 mm PAH, 5 ?m 18℃ 0.4 ml/min A: water B: acetonitrile 50 to 95 %B in 22.5 min1 2 B e n z ( a ) p y r e n e0 . 0 8 1 3D i b e n z ( a ) a n 0 . 1 0 1 4B e n z ( g h i ) p e r y0 . 1 1 1 5 I n d e n o ( 1 2 3 ) p y0 . 1 0PNAs/PAHs improve at sub-ambient!No.102 PNAs分析条件优化－柱温10 111415mAU56 8 9 712 13 16 17Column Temp 18°C 25°C 30°CP e a k # C o m p o u n d 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 N a p h t h a l e n e A n t h r a c h i n o n e A c e n a p h t h e n e F l u o r e n e P h e n a n t h r e n e A n t h r a c e n e F l u o r a n t h e n e P y r e n e B e n z ( a ) a n t h r a c C h r y s e n e B e n z o ( b ) f l u o r . B e n z o ( k ) f l u o r . B e n z ( a ) p y r e n e D i b e n z ( g h ) a n B e n z ( g h i ) a n B e n z ( g h i ) p e r y I n d e n o ( 1 2 3 ) p yNo.103301 234201005 10 15 20 25 minSample Colum Mobile phase 50:50 Flow rate Gradient min Column Temp:PNA EPA Standard 250 x 2.1 mm PAH Water/Acetonitrile0.4 ml/min from 50 to 95 %B in 22.5 18, 25 and 30 °C 柱温箱前视图....From AutosamplerTo Flow Cell Inlet CapillaryNo.104 柱识别系统Product number Serial number Batch number Geometry [mm] Stationary phase Particle size Number of injections Maximum pressure allowed [bar] Maximum temperature recommended [C]recommended Maximum pH 79916O D-552 5 100x2.1 ODS Hypersil 10 ?m 999 400 70 12柱识别必须安装在距离识 别天线2mm范围之内，且 柱识别上HP的图标朝上。No.105 柱切换阀 (可选)(Rheodyne 7750)Vespel rotor seal (6Ceramic stator port)Electronic ActuatorNo.106 第八章 Agilent 1100 检测器VWD/DADNo.107 Agilent 1100 VWD检测器性能/优点...?从190－600nm波长范围，噪音小，基线稳定(±0.75x10-5 AU)?可变波长检测，可以对不同物质的检测获取更换氘灯及清洗检测池非常方便 内置钬玻璃可以非常快速方便地进行波长校 根据不同需要选择不同的流动池。推荐 …?最大灵敏度。? ?产品开发及质量控制 应用需要高灵敏度检测器?准。?No.108 Front Elements-VWDlamp流动池的后压非常重要，使用正 确的出口连接管。No.109 光学单元 - VWD光路氘灯光源透镜 滤光片（钬玻璃/遮光）入射狭缝样品光电二极管 数模转换板反射镜1＃ 流通池 光栅分光器 反射镜2＃ 参比光电二极管 数模转换板No.110 VWD 检 测 器 灵 敏 度AU 0.000310 pg AnthraceneSignal: 0.23 mAU Baseline noise: &1x10-5AU0.000250.00020.000150.00010.000050012345minSample Column Mobile phase Flow rateAnthracene standard 100 x 2.1 mm ODS Water/Acetonitrile 30:70 0.4 ml/minNo.111 多组份分析mAUGinko Biloba extractQuercetin KaempferolSensitive quantitation of active compounds at 370 nm30002500Monitoring impurities at 204, 254 nm2000Isohamnetin204nm15001000370nm5000254nm0 2 4 6 8 10 12 14 16 18minNo.112 选择性和灵敏度HydroxybenzotriazolemAU1200Quantitation of antibioticsTrimethoprim1000800Chloramphenicol Nalidixic Acid Furazolidone 204nm600400254nm200368nm0 0 2 4 6 8 10 12 14 minNo.113 VWD流通池Standard and MicroHigh PressureNo.114 高性能的Agilent 1100 DADNo.115 Agilent 1100 二极管阵列检测器性能/优点...?灵敏度高 (±1x10-5AU)。 两个灯，波长检测范围宽（190－950 nm）。 1024个二极管 和 1 nm 狭缝 。 可变狭缝。 根据不同需要选择流动池。 可以进行自动峰检索 。 利用紫外谱图进行峰确认??推荐 ...? ? ? ??研究及方法开发 多波长检测 峰纯度检查 峰确认（定性）???No.116 Front Elements - DAD进口管可以直接连接到色谱柱钨灯氘灯流通池室No.117 DAD光路钨灯耦合透镜 氘灯光源透镜 (消色差透镜)阵列 支撑透镜氧化钬滤光片 Flow cell光谱透镜狭缝 光栅No.118 二极管阵列检测器与传统紫外扫描检测器比较DetectorSourceEntrance slitDiode-array detectorEntrance slit SourceExit slitFlow cellFlow cell Concave gratingConcave gratingConventional Scanning DetectorDiode-array DetectorNo.119 DAD流通池Std. and Semi-Micro Micro-High PressureNo.120 可编程光路狭缝--超微机械设计SlitMotorNo.121 可 编 程 光 路 狭 缝????Replaces three conventional slits Extends slit width to 1 and 16 nm For fast optimization of resolution, sensitivity and linearity Documents slit width for GLP traceabilityHP 1050 DADthree fixed slits for 2, 4 and 8 nmHP 1100 Seriesone programmable slit for 1, 2, 4, 8 and 16 nmNo.122 选择不同狭缝--灵敏度与分辨率0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 230 240 250 260 270 280 nm0.7 mAU 1 nm slit 2 nm slit1 nm2 nm 4 nm 8 nm & 1x10-5AU noiseNo.123 190-950nm宽波长范围－ 有利定性分析Tartrazine Amaranth Patent blue Brilliant blueHPLC detectionAbsorbanceOther diode-array detectorsHP 1100 Series300400500600700800900Wavelength (nm)Now 190-950nmNo.124 定性分析--峰纯度检验pureAbsorbanceimpure7.67.88.08.28.4Time (min)Purity Match 999Purity Match 764Absorbance200Wavelength (nm)400200Wavelength (nm)400No.125 定性分析--探索三维立体影像Spectral Acquisition Modes ?All spectra ?Every 2nd spectrum ?All in peak ?Apex+Slopes+Baselines ?Apex+Baselines ?NoneAbsorbanceNo.126 DAD测试功能及诊断? ? ? ? ?DAD自检 暗电流测试 灯强度测试 钬玻璃测试 流通池测试? ? ?滤光片测试 波长校正 模拟信号输出测试No.127 第九章 熟悉化学工作站及其操作系统本章内容：?Windows NT及Windows2000概述?如何创建快捷键?如何维护计算机系统No.128 Windows 界面：通过此键进入磁盘及文件目录。垃圾斗，用于盛放被删除的子目录及文件任务栏Start键用于开启某个应用程序No.129 Windows菜单用鼠标单击Start键，所有菜单均显示出来。Program: 包括Windows Explorer, Word Pad, Paint, HP ChemStationDocument: 显示最近使用过的15个文件。Settings: 包括Control Panel, Printers, TaskbarShutdown: 用于关闭计算机。No.130 Windows的一些有用的功能：?把常用执行程序放在 Start菜单的第一级。 用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开Windows Start Menu窗口，用 鼠单击Program图标，打开Windows/Start Menu/Program窗口，用鼠标右键拖 拽所需应用程序图标到Windows Start Menu。当再打开Start 菜单时，所选择 的应用程序显示在Program菜单之上。 Windows/Start/Program窗口Windows Start Menu 窗口No.131 ?在 Desktop 创建快捷键。用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开Windows Start Menu窗口， 用鼠单击Program图标，打开Windows/Start Menu/Program窗口，用鼠标右 键拖拽所需应用程序图标到Desktop上。此步骤完成后，所需应用程序图 标显示在Desktop上。 ?改变 Desktop的属性：用鼠标右键单击desktop的任意位置，在出现窗口选 择Properties, 在Display Properties窗口选择设置项目。No.132 计算机操作系统的维护?经常性删除临时文件子目录中及垃圾斗中的文件。 ?使用ScanDisk或Checkdisk检查盘上的错误。 ?消除硬盘上的碎片。 ?使用杀病毒软件。 ?创建Emergency Repair disk (Windows NT)。――运行rdisk。 如果计算机被非法关机，临时文件子目录中会留下许多临时文件，如果不及时 清除，这些文件会影响系统的性能。所以，这些文件应定期删除。 Windows中有许多工具可以帮助你对操作系统进行维护。ScanDisk和 Disk Defragmentor是非常重要的两个工具。ScanDisk可以扫描硬盘的坏区，然后或者 对坏区进行修复，或者锁定坏区。Defragmentor通过去除硬盘上的碎片来提高 系统的操作性能。No.133 工作站软件及文件的维护? 化学工作站软件目录结构C:ExcelHpchemWindows12BackupCoreDriversGcHelpenuLanguageLcRepstyleSpeclibsSysDataMethodsSequenceTempVerifyDemoLab1.d所有数据文件均存放在Data子目录下，扩展名为 .D，每个数据文件为Data子 目录下一单独子目录，里面包括各种扩展名的文件：?.CH－色谱图文件 ?.UV－紫外谱图文件 ?.MAC－样品信息文件 ?.REG－二进制文件?.LOG－logbook文件?.M－方法文件（存贮数据时选择方法存贮在数据文件中）No.134 所有方法文件均存贮在Method子目录下，扩展名为.M。 所有序列文件均存贮在Sequence子目录下，扩展名为.S。?定期拷贝有用的文件。在工作站中有用的文件是指： 1. 数据文件(xxx.D)。 2. 方法文件(xxx.M)。 3. 序列文件(xxx.S)。 定期拷贝这些文件后，清除工作站子目录下的这些文件，以节省硬盘空 间，使运算速度正常。 ?禁止使用盗版软件，建议在运行工作站的同时，不要使用中文操作平 台，防止与工作站发生冲突。No.135 It’s Lab Time Now!No.136 启动化学工作站配置仪器 启动化学工作站任务安排No.137 Instrument On-lineONON联机操作，进行仪器控制操作Instrument off-lineON脱机操作，进行数据分析OFFNo.138 化学工作站界面Top Tool Bar Status Tool Bar样品视图系统视图Online SignalNo.139 化学工作站Views菜单ViewsMethod and Run Control ?Data Analysis ?Report Layout ?Verification (OQ/PV) ?Diagnosis?Full menu or short menuNo.140 在化学工作站中有5个功能界面： ?Method and Run Control ?Data Analysis ?Report Layout ?Verification (OQ/PV) ?Diagnosis Method and Run Control－仪器控制; 方法编辑、运行; 序列编辑、运行。 Data Analysis－数据分析：包括谱图优化，积分优化， 校正表建立，报告格式选择等。 Report Layout－用户编辑个性化的报告格式。 Verification (OQ/PV)－仪器认证。 Diagnosis－利用工作站诊断仪器硬件。No.141 Change ViewsNo.142 第十章 方法编辑、保存本章内容：方法中所包含的内容。 ? 如何编辑采集参数。 ? 如何显示Logbook及实时显示检测信号。?No.143 什么是方法??方法：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要的所有参 数：数据采集参数、 数据分析参数及命令或宏指令。 ?方法的文件名为：xxx.m。方法的组成：方法信息(Method information) ?仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) ?数据分析参数(Data Analysis) ?运行时间表(Run Time Checklist)?No.144 用户图形界面（GUI）单击图标打开菜单单击此图标进行控制No.145 Instrument 菜单 - 改变每个部件的参数No.146 编辑一个方法使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法No.147 选择所要编辑的内容No.148 方法信息 (Method Information)No.149 泵的操作参数包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(Stop Time)，后运 行时间(Post Time)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(Pressure Limits)等No.150 自动进样器参数??样品盘容量 ?100 x 2 ml vials in 1 tray ?40 x 2 ml vials in 1/2 tray ?15 x 6 ml vials in 1/2 tray ?Microvials with sleeves 进样体积 ?0.1 - 100 ul－标准进样 ?最大 1800ul－ 使用多次进样装 置 ?最大900 ul 进样，不使用多次进 样装置，但需要扩展进样装置设置参数包括：进样体积(Injection)，洗针(Needle Wash) ，程序进样(Injection Program) 优化进样(Optimization)，取样速度(Draw Speed)，注射样品速度(Eject Speed)，取样位 置(Draw position)，时间设置(Time)等。No.151 自动进样器特殊功能?洗针 降低样品残留 多次吸样 用于进样体积大于100μ L?计量泵?旁路 标准进样系统的整个延迟体 积为300μL, 切换到旁路后 延迟体积降到 6.2μ L。进样程序 根据需要编制进样程序泵 色谱柱 废液 4通路旋转密封阀?最大动态进样范围: 0.1 ?l-1.8 mlNo.152 进样程序进样体积从 0.5 至 5 ?l。 用于样品衍生及其前处理。? ?样品反应物 计量泵取样系统泵 柱子废液No.153 柱温箱?控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次数????No.154 DAD参数设置可以选择存储 5 个信号 ?信号波长范围 191 - 949 nm ?可变狭缝： 1, 2, 4, 8, 16 nm ?可以时间编程 ?可以保存数张或所有光谱?No.155 运行时间表(Run Time Checklist)选择在方法中要执行的项目No.156 存贮方法从Method菜单选择Save Method / Save Method as或从存贮方法工具图标 存贮方法。No.157 选择监控信号从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change，在Edit Signal Plot窗口选择要监控的信号。No.158 信号显示No.159 运行方法要分析单个样品, 从RunControl菜单选择 Sample Info..., 输入样 品信息。样品信息包括：操作者姓名(Operator Name)，存盘数 据文件(Data File)，样品参数(Sample Parameters)。然后运行方 法(Run Method)。No.160 补充说明1. 查看Logbook:从View菜单选择Logbook，单击Current Logbook显示当前Logbook内容。No.161 2. 泵的辅助功能Instrument ? More Pump? Auxiliary...从泵的辅助功能可以设 置最大升流速率，冲程 大小，压缩因子补偿。No.162 泵的控制与检测器的控制类似检测器: 灯开/关 (钨灯/氘灯) 自动开灯 模拟信号输出范围No.163 3. 自动进样器扩展功能No.164 自动进样器设置No.165 第十一章 谱图优化本章内容：?谱图调用?谱图优化 ?谱图加标注No.166 调用数据文件在Data Analysis界面，File菜单下选择Load Signal。No.167 谱图优化在Data Analysis界面下，Graphics菜单下选择Signal Options...使用 Signal Options... 功能来优化色谱图的显示No.168 谱图优化的工具色谱图控 制图标谱图优化图标设置标注格式 文字标注线形标注 删除标注单独/重叠显示 化合物名称 基线 轴移动标注WMF图标注谱图显示方式 保留时间显示 标题显示 打印窗口 拷贝No.169 在色谱图上加标注选择: ?字体和字型 ?字体大小 ?字体颜色、旋转角度等No.170 谱图处理工具谱图处理工具加标注工具Add Annotation ?Draw Line in Window ?Move Annotation ?Delete Annotation?No.171 第十二章 积分优化本章内容：?如何建立积分事件 ?如何使用信号选项框 ?如何使用积分时间表 ?自动积分 ?手动积分No.172 增强积分方式增强积分方式可以提供: ?当基线波动时，基线的定位。 ?使用初始峰高参数去除噪音峰。 ?控制积分开始和结束的标识。 ?在噪音中定位信号峰。 ?使用二阶导数确定肩峰。No.173 调用信号执行积分您也可以通过以下方式进行积分: ? 从 Integration 菜单选择 Integrate 或 Auto Integrate。 ? 选择积分工具。 ? 运行一个包括数据分析的完整方 法。No.174 自动积分?检查开始和结束区域，确定噪音。 ?赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. ?对第一次积分赋予一个临时峰宽值。 ?设置Area Reject为0。 ?执行测试性积分，有可能重复几次。 ?基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。 ?优化Slope Sensitivity和Height Reject。?从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。No.175 积分事件信号选项框 高级基线选择初始值No.176 高级基线Peak Peak Unassigned AreaBaselineAbsorbanceAdvanced Integration Options OffAdvanced Integration Options On121314151617181920Time [min.]No.177 积分事件表添加积分事件功能删除积分事件功能No.178 积分工具栏对当前色 自动积分 谱图积分积分任务积分事件设置Baseline Now 设置Baseline Hold 设置拖尾 切线撇去设置肩峰检测 设置固定峰宽 设置最小峰面积积分设置斜率No.179 作为方法的一部分存贮积分参数存贮积分事件到方法保存方法No.180 手动积分工具自动积分 选择积分工具 对目前色谱 图进行积分 积分事件手动积分 画基线手动积分 负峰手动积分 去除峰 手动积分 裂分峰手动积分 切线撇去No.181 手动积分?Draw Baseline ?Negative Peak(s) ?Tangent Skim ?Split peaks ?Delete Peak(s) ?All ValleysNo.182 峰类型符号峰起止点符号 B 基线 P 基线渗透V其它符号峰谷点H 水平基线T 切线撇去M 手动积分+ 参考峰A+ 面积加和峰 S 溶剂峰I 内标峰N 负峰警示符号+ 高于含量上限 － 低于含量下限No.183 基线符号B=基线 V=峰谷点BBBB P=基线渗透BVB H=水平基线BPBBHHNo.184 第十三章 校正及定量基础在这一节中您将学习:? 校正的概念 ? 校正的必要性 ? 如何进行校正? 建立回归线的作用No.185 校正? 校正即是利用某个峰的峰高或峰面积来确定其 对应 组分的浓度或含量? 当检测器灵敏度针对不同的组分而变化；及检 测器 对同一组分不同含量响应值发生变化时须做校正No.186 校正过程? 首先准备一个混合标样，其中感兴趣组分的浓度 须准确知道? 运行标准样品 ? 建立校正表 ? 运行待测样品并使用校正表分析它? 需要时进行再校正No.187 单级校正? 对每一峰只做一次校正?单级校正中做了如下假设： 响应因子不会因为某峰对应物质的含量 变化而发生变化响应曲线须通过原点No.188 单级校正因子响应值 (A或H)含量No.189 多级校正?? ?对每一峰需做至少两次校正可以补偿检测器对不同含量的样品组分而给 出非线性响应 响应曲线可以不通过原点No.190 多级校正过程? 首先准备一个混合标样，其浓度应高于欲分析物 浓度 ? 将浓标样等梯度稀释，运行每一级稀释好的标样 ? 在每一级上进行校正 ? 继续稀释混合标样，使其包含感兴趣样品的浓度 范围，并输入每一级对应的含量值 ? 运行待测样品并使用校正表分析它 ? 需要时进行再校正No.191 点到点校正曲线响应值(A或H)含量No.192 线性拟合（最小二乘法）响应值(A或H)含量No.193 非线性拟合响应值 (A或H)响应值 (A或H)含量含量No.194 工作站的定量方法在这一节中您将学习：?? ? ?各种不同定量方法的概念每一种定量方法固有的假定 明白在选择定量方法时须考虑的各种参数 观察选择了不同的定量方法时其结果的差别No.195 定量方法? 百分比法PERCENT ? 归一化法NORM%? 外标法ESTD? 内标法ISTD ? 外标百分比法ESTD% ? 内标百分比法ISTD%No.196 面积百分比法AREA%AREA(pk) AREA%= 假定检测器响应都相同 所有组分都流出 所有组分都被检测到ΣAREA(pk)x100%优点无需做校正 简单、快速的定量过程 进样量不要求严格缺点以上所有的假定 需测量所有的组分 所有的面积都必须准确No.197 面积百分比法举例面积值 C12 C14 C16 280 250 220 面积百分比法% 26.2 23.4 20.6C18320----------107029.9-----------100.1使用面积百分比法分析某脂肪酸甲酯样品中C12, C14, C16, C18的 含量。No.198 校正因子含量 面积100 3000100 2500200 4000绝对校正因子 RF=含量/面积RF值与组分的含量及其它组分的存在无关 RF值可以校正检测器响应No.199 脂肪酸甲酯校正因子计算举例面积值C12 C14 250 290面积百分比％20.2 23.4RF25/250=0.100 25/290=0.086C16C18330370 124026.629.8 10025/330=0.07625/370=0.068单点校正，标样为含C12, C14, C16, C18均为25ng的脂肪酸甲酯No.200 归一化法(NORM)RF(pk) x AREA(pk) NORM%= Σ[RF(pk) x AREA(pk)] x100%假定所有组分都流出 所有组分都被检测到优点简单、快速的定量过程 进样量不要求严格缺点所有组分峰都要流出 需测量所有的组分 必须校正所有的峰No.201 脂肪酸甲酯 归一化法NORM%举例面积 RF RFxAREA NORM%31.8% 24.4% 19.0% 24.8% 100.0AREA% (前例中值）26.2% 23.4% 20.6% 29.9% 100.1C12 280 0.100 28.0 C14 250 0.086 21.5 C16 220 0.076 16.7 C18 320 0.068 21.8 88.0使用归一化法分析脂肪酸甲酯未知样品No.202 外标法（ESTD）含量＝面积(pk) x RF(pk)优点校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到缺点进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正No.203 ESTD法计算举例面积值C12 C14 C16 C18 280 250 220 320RF0.100 0.086 0.076 0.068RF x AREA28.0ng 21.5ng 16.7ng 21.8ng使用外标法分析与前例相同的脂肪酸甲酯未知样品No.204 内标法（ISTD）面积(pk) x 含量(ISTD) x RF(pk,标样)含量(pk) ＝优点面积(ISTD) x RF(ISTD,标样)进样量不严格要求 只对欲分析的组分峰做校正 校正检测器的响应缺点必须加一个组分进到样品No.205 ISTD法计算举例面积值 C12 C14 C15 C16 280 250 310 320 RF（从前例中得到)0.100 0.086 0.081 0.076C183200.068单点校正，标样脂肪酸甲酯含C12, C14, C16和 C18四组分 各25ng，并加入一含量为 25ng 的内标物C15。No.206 ISTD法计算举例（接上页）面积值 C12 C14 280 250 RF x AREA （ESTD) 28.0ng 21.5ng ISTD结果 30.8ng 23.7ngC15C16 C18280220 32022.7ng16.7ng 21.8ng25ng18.4ng 24.0ng使用内标法分析与前例相同的脂肪酸甲酯未知样品No.207 选择内标物的标准1. 样品中不存在 2. 可迅速容易得到 3. 化学性质与样品相似 4. 与样品有相同的浓度范围 5. 不会与样品发生反应 6. 在感兴趣组分附近流出7. 可得到分离良好的、干净利落的峰8. 色谱性质稳定No.208 各种定量方法比较AREA%C12 C14 C16 C18 26.2% 23.4% 20.6% 29.9%NORM%31.8% 24.4% 19.0% 24.8%ESTD28.0ng 21.5ng 16.7ng 21.8ngISTD30.8ng 23.7ng 18.4ng 24.0ng使用四种分析方法分析脂肪酸甲酯样品，其中含C12, C14, C16 和C18四组分浓度未知No.209 定量方法总结优点AREA% 无需校正 进样量不严格要求缺点检测器的响应必须一致 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须被检测到 所有面积都须准确 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须测定 必须校正所有的峰NORM%进样量不严格要求ESTD校正检测器的响应 只对感兴趣峰做校正 无需所有峰都流出 无需所有峰都被检测到 其结果的报告可选择不同 的单位进样量不严格要求 只对感兴趣峰做校正 校正检测器的响应 其结果的报告可选择不同 的单位进样量必须准确 仪器需有很好稳定性ISTD必须在所有样品中加入 一个组分 样品和标样的准备工作 更加复杂No.210 外标百分比、内标百分比法*在 Sample Info. 中输入样品参数 Sample Amount 而且选择对应的 报告格式ESTD% 或ISTD%No.211 第十四章 建立校正表本章内容:? 建立校准曲线的过程。 ? 如何设置 calibration settings. ? 如何进行再校正(Re-Calibrate)。No.212 建立校准表的过程?配置系列标样*，然后逐一进样分析。 *系列标样浓度范围要包含未知样品浓度。 ?调用低浓度标样数据，优化谱图显示。 ?优化积分参数，获得满意的积分结果 后存贮积分事件到方法。 ?从Level 1开始做校正曲线。 ?逐个对每个标样进行优化谱图，优化 积分后，分别加入校正表。 ?检查校正曲线，把校正曲线存入方法。No.213 Signal Details选择、规定一个方法中要进行定量处理的信号No.214 Calibration SettingsNo.215 调用标样进行积分参数优化No.216 建立一级校正曲线No.217 校正表的建立填入: 化合物名称 浓度 选择: 参比峰 内标 内标标号#No.218 调用信号 -加入二级校正输入二级标样含量No.219 加入更多的级别输入对应标样含量线性相 关系数No.220 把校正表存入方法Save Table to MethodNo.221 再校正当校正曲线上的点发生偏移，需要对相应的浓度点做再校正。 再校正过程如下： ?进一针相应浓度的标样。 ?调用此数据文件。 ?在Calibration 菜单下，选择Recalibrate…, 选择需要再校正的级别，然后 选择如何再校正－Average或Replace。工作站自动进行再校正。No.222 第十五章 设定报告格式本章内容:? 如何定义一个报告类型 ? 报告文件的存贮方式 ? 报告类型选择No.223 定义报告From Data Analysis:No.224 定义报告: 报告输出目的地如果报告存贮成文件形式：.TXT - 只有报告文本存贮成 ASCII文件 .WMF - 每个报告的图形存贮成 meta file .DIF - 数据存贮成 EXCEL的DIF 格式(Data Interchange Format) 只适用于短报告格式 .CSV - 数据存贮成数据库文件 (Comma Separated Values), 适用于短报告.XLS - EXCEL报告格式 .HTM - 超文本格式, 可以使用Internet 浏览器浏览No.225 使用网络浏览器IE查看报告No.226 定量方法及报告格式定量方法? ?? ?百分比(Percent) 外标法和外标百分比法[External Standard(ESTD) and ESTD%] 归一化法(Norm%) 内标法及内标百分比法[Internal Standard(ISTD) and ISTD%]报告类型None Short Detail Header + Short GLP + Short GLP + Detail Short + Spectrum Detail + Spectrum Full Library Search Performance Performance + Noise Performance + Library Search Extended PerformanceNo.227 仪器参数曲线编辑No.228 报告格式存贮到方法No.229 打印报告打印报告No.230 报告工具打印预览 选择校正工具定义报告打印报告显示/隐藏当前色谱图No.231 第十六章 故障诊断与系统维护本章内容：诊断工具 ? 仪器详细信息 ? 进入logbooks ? EMF（Early Maintenance Feedback） ? 内置仪器诊断功能 ? 如何使用维护光盘?No.232 诊断界面（Diagnosis）No.233 仪器详细信息? 选择 Update Variables Display 显示仪器某一组件的详细信 息，例如firmware 版本号，仪器序列号等。 ? 选择 Show Module Details 显示仪器的结构图。No.234 进入LogbooksNo.235 Error LogbookNo.236 Runs LogbookNo.237 维护Logbook维护 logbook文件存贮在某一组件内，不是在计算机内。No.238 早期维护反馈（EMF）? 基于仪器的使用情况，计划仪器维 护的周期。 ? 根据以前的使用经验，输入需要维 护的限制值( limits) ? 当实际值达到需要维护的限制值时 ，EMF图标上的绿色对勾标记变成 黄色问号。No.239 分析问题诊断1. 从左侧下拉菜单中寻找 分析过程中您所遇到的 问题。 2. 在右侧的下拉菜单中， 选择可能的原因。 3. 按提示执行测试。 4. 使用Maintenance and Repair CD-ROM，提示 如何测试和维修。No.240 诊断测试开始测试 测试解释测试过程No.241 测试选择No.242 维护光盘维护光盘包括： ?多媒体、逐步的维护过程 ?查备件号。No.243 日常维护溶剂准备：过滤真空过滤装置 使用HPLC纯溶剂防止固体颗粒损伤仪器或柱头 使用小于 0.5?m过滤膜.有机物 - Teflon 水 - Nylon 66No.244 溶剂准备不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器 ，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤膜过滤溶剂去除微生物。???每两天更换或过滤溶剂。避免溶剂瓶直接日照。?No.245 溶剂脱气?目的 ?排除溶解在流动相中的氧气和氮气 ?脱气方法 ?He脱气 ?真空脱气 ?回流加热脱气 ?超声脱气No.246 溶剂信息避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：?卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。??能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。???含有强络合剂的溶液。四氯化碳和异丙醇或THF混合液。?No.247 NameAcetic AcidAcetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide溶剂的相溶性Immiscible MiscibleDioxanEthylacetateEthyl AlcoholDi-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane PentaneI-Propyl Alcohol Di-PropyletherTetrachloroethane TetrahydrofuranTolueneTrichloroethane Water XyleneNo.248 溶剂的紫外吸收截止波长Solvent Acetonitrile Water Cyclohexane Hexane Methanol Ethanol Diethyl Ether Dichloromethane Chloroform Carbon Tetrachloride Tetrahydrofuran Toluene UV Cutoff (nm) 190 190 195 200 210 210 220 220 240 265 280 (210) 280UV Cutoff is the wavelength at which absorbance equals 1 AU.No.249 初始化和平衡初始化HPLC泵柱平衡移走溶剂与系统中的气泡 使溶剂组成变化更容易确保分析结果再现性 对于反相柱使用5～10倍柱体积 流动相平衡色谱柱 No.250 预柱和保护柱从泵来的 流动相预柱进样口保护柱预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱分 析 柱至检测器No.251 色谱柱保护过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相No.252 HPLC柱测试对于一根新柱子，在流动相组成不变的情况下进行下述 实验并记录： 1. 记录理论塔板数N，以及: 柱子长度及内径. 测试样品名称及K’值. 固定相和流动相. 流动相流速. 进样量. 温度.2. 峰对称性包括苯酚、胺 3. 记录柱子压力.No.253 样品准备过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解No.254 The Good User下列优良常规实验操作能够最大限度降低维修费用：清洁的仪器、 流动相和样品; 进行必要的过滤。 ?保证溶剂的相溶性。 ?仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污染。 ?对仪器的维护和保养进行记录。?No.255 混合问题问题：+ 一个有紫外吸收的流动相与一个没有紫外吸收的流 动相动态混合产生噪音，增加静态混合器可以降低 这种噪音。 缺点: 增加了延迟体积静态混合器No.256 基线噪音可能的原因： 检测池脏检测池灯能量下降由泵引起的脉冲 检测器上的温度效应 检测池中有气泡通过Time (min.)No.257 基线噪音停泵是噪音是 否依然 存在否检测器?其它要考虑的问题 ▲是否改变了流动相的组成？ ▲是否改变了检测波长? ▲在你的仪器上使用的最后的流动相是什么? ▲流动相是否相溶? ▲流动相是否干净?泵或流动相?No.258 基线漂移梯度洗脱引起的 温度不稳定（RID） 流动相脏 柱子没有用流动相平衡 系统中污染物溢出No.259 鬼峰鬼峰－没有进样就有色谱峰出现。 原因－流动相脏20% - 100% MeOH梯度洗脱，没有进样No.260 柱外扩展增加柱外死体积用较短的、窄内径的毛细管连接进样器和色谱柱以及柱子和检测器。 确认连接管的接头都相互匹配。 使用死体积小的流动池 减小进样量No.261 峰形问题1? 双峰柱头塌陷正常双峰柱头塌陷或柱床运动。 泵头过滤芯(Frit)部分堵塞。 组份共流出No.262 2? 峰扩展所有峰都扩展 柱效降低或有柱塌陷 进样体积过大 流动相粘度大部分峰扩展 前一次分析样品的流出物 高分子量样品－蛋白质或聚合物No.263 3? 拖尾（拖尾因子&1.2）原因：部分峰拖尾二次保留效应 残留硅醇的相互作用小峰在大峰后洗脱出来正常 拖尾所有峰均拖尾柱外效应 柱子失效 柱头有污染物堆积 重金属反应正常拖尾No.264 拖尾因子A+B 2AA Bt=Excellent t = 1.0 - 1.05Acceptable t = 1.2Unacceptable t=2Awful t=4No.265 4? 前伸峰拖尾因子 & 0.9正常前伸原因： 柱子过载 小峰在大峰之前洗脱出来No.266 5? 负峰正常负峰原因 样品吸收比流动相吸收小。 溶解样品的溶剂通过柱子时平衡被破坏 RID中最常见No.267 压力问题压力问题压力过高压力过低压力波动No.268 压力测量压力过高? 柱子进口过滤芯被污染 ? PURGE阀过滤芯被污染 ? 色谱柱被污染 ? 连接管路，尤其是针座毛细管堵塞 ? 进样器旋转密封阀被堵塞使用此阀 分割系统? 进样针或针座被阻塞No.269 监测高压No.270 压力测量压力过低?溶剂进口过滤芯堵塞 连接管路泄漏或其它备件（泵密封垫）??溶剂或流速改变主动阀失灵 四元比例阀失灵溶剂进口 过滤芯???单向出口阀失灵色谱柱失效 (固定相)?No.271 监测低压No.272 压力波动? 溶剂进口过滤芯堵塞 ? 溶剂未脱气 ? 泵的密封垫老化溶剂进口 过滤芯? 出口单向阀失效 ? 主动阀失效*通常是：泵内有气泡No.273 监测压力变化No.274 监测压力变化监测压力波动是非常 快捷的方式来判断泵 的性能。此值应非常 稳定。No.275 附录：高级功能简介?序列功能简介?如何建立序列表 ?如何执行自动再校正 ?如何作循环再校正 ?数据文件如何命名 ?如何使用 Sequence Summary?DAD高级功能?如何优化色谱条件、提取色谱图 ?如何提取吸收光谱、创建谱库 ?如何进行峰纯度检测No.276 编辑序列进行自动分析1进入 Method and Run Control 界面。 2.从 Sequence 菜单，选择 New Sequence。 3 编辑 Sequence Parameters. 4.编辑Sequence Table. 5.选择Sequence Output. 6. 存贮序列。 7. 从RunControl菜单或从Sequence Table运行序列。No.277 编辑Sequence ParametersNo.278 序列数据文件格式自动进样格式: 003- 样品瓶号 (Vial Number) 01 序列号(Sequence Line) 01 进样次数(Replicate)前缀(Prefix) Prefix01 Prefix02, etc. 共8个字符。循环标样格式: C1-02001 C 表明使用循环标样 1 标样号 02 序列号 001 进样次数No.279 序列表中再校正No.280 循环再校正No.281 Bracketed 序列No.282 使用 Insert Vial Ranges填写校正表No.283 序列输出通过序列的Summary Report，您可以选择简 单的一页Summary报告 或复杂的Summary报告 ，包括交叉样品的统计 报告。No.284 编辑Sequence Summary标准或扩展统计No.285 扩展统计No.286 存贮序列文件存贮当前的序列No.287 运行序列?从RunControl菜单 选择Run Sequence 或按F6键 ?从Sequence Table运行No.288 部分序列及预览模式 Partial SequenceNo.289 自动进样器图标显示显示序列表中样品瓶的位置及序列表的运行状态， 单击此图标建立序列表。从 View菜单选择Sampling Diagram.No.290 DAD高级功能Display Options显示紫外谱图No.291 紫外谱图显示扣除背景的紫外谱图紫外谱图和参比谱图No.292 谱图处理工具谱图处理工具图标光谱选项选择色谱 图上任意 一点紫外 谱图选择第二个参比峰 选择峰顶 紫外谱图平均谱图 选择一组 紫外谱图选择第一个参比 选择峰纯度No.293 光谱选项 -紫外谱图No.294 光谱选项自动扣除背景 ? 平滑谱图 ? 使用导数谱图?No.295 紫外谱库: 原理选择某一色谱峰提出色谱峰上的吸收光谱打印出匹配系数Match: 998 光谱图与谱库中光谱比较250 W a v e l e n g t h (nm)300250300W a v e l e n g t h (nm)No.296 紫外谱库: 当前的局限性紫外谱图不特征。紫外谱图依赖于流动相的变化而变化。 未分离开的峰会给出错误结论。 重叠峰会给出错误结论。 没有商业谱库。No.297 影响谱图匹配的因素狭缝宽度 步径保留时间窗口吸收阈值 背景噪音 谱图噪音 导数谱图No.298 创建谱库No.299 输入谱库名称及描述No.300 提取化合物光谱图No.301 把谱图加入谱库No.302 波长表工作站自动 标出物质的最 大吸收和最小 吸收波长。No.303 谱图管理No.304 存贮谱库文件No.305 开始谱图检索 - 打开谱库可以打开自己工作站中的谱库， 也可以通过网络调用网上的谱库。No.306 检索模板No.307 检索谱图No.308 检索结果No.309 检索工具谱图处理工具 调用谱库 保存谱库编辑谱库标题信息打印谱库中谱图 退出当前谱库 编辑谱库中谱图 向谱库添加光谱 进行谱库检索 编辑谱库检索条件No.310 峰纯度在峰的洗脱过程中，通过比较所记录的吸收光谱图来评估 色谱峰是否包含不纯的物质。光谱处 理工具 图标峰纯度 检测No.311 峰纯度分析窗口阈值曲线模拟曲线Spectral Overlay3-D 显示 峰纯度信息 等高图No.312 峰纯度信息 -纯峰No.313 峰纯度信息 - 不纯峰No.314 附加信息 - 差谱差谱 - 纯峰差谱 - 不纯峰No.315 峰纯度性能影响峰纯度的因素:? ? ? ?化合物特征。 媒介化合物（溶剂）的吸收。 噪音大小。 化合物的波谱范围。优化条件:? ? ? ? ?使用光强度大的光源，对检测器进行常规维护。 选择合适的流动池和狭缝。 采集足够的数据点。 Peakwidth设置值合理。 样品浓度应在检测器的线性范围内。No.316 选择最大吸收波长等高图（Isoabsorbance Plot ） 吸收强度、波长和保留时间作为等吸收 的曲线图。No.317 等高图 （Isoabsorbance Plot）CursorQuick View Zoom Signal Spectrum黑色色谱图表 示当前波长下 的色谱图No.318 3D PlotNo.319 实验一：重新安装化学工作站如果您的化学工作站在操作过程中被误删某些执行程序或使用其它软件与化学工作站发生冲 突，致使化学工作站不能正常运行，那么就需要对化学工作站软件进行重新安装。重新安装化学工作站分四步进行： ▲拷贝：▲拷贝有用的文件－包括数据文件，方法文件及序列文件。 数据文件在 C:\HPCHEM\1\DATA子目录下； 方法文件在 C:\HPCHEM\1\METHODS子目录下； 序列文件在 C:\HPCHEM\1\SEQUENCE子目录下。 ▲拷贝Winnt子目录下win.ini文件。▲删除：▲删除HPCHEM子目录及子目录下所有文件。 ▲修改Winnt子目录下win.ini文件：删除win.ini文件中以[PCS], [PCS1] 为标题的 程序段。 ▲删除所有的（包括桌面、菜单中的）快捷方式。▲安装：▲运行光盘上的Setup.exe文件； ▲选择需要安装的软件并输入其序列号，执行安装。▲配置：▲选择仪器的工作状态； ▲配置仪器的IP地址。 No.320 修改win.ini文件修改完毕，存贮并退出win.ini编辑。No.321 安装软件把化学工作站软件CD-ROM盘放入光驱，用鼠标单击Start键，选择Run命令，在Run 对话框Open右侧空白栏中输入D:\setup.exe（假设D为光驱）后用鼠标单击OK键，进 行化学工作站的安装。?计算机启动工作站安装程序，进入工作站安装画面。单击Add/Change键，选择 需要安装的软件名称。No.322 ? 选择G2170AA LC ChemStation软件，单击右上方的Add键，然后在New License Number框输入G2170AA软件的登录号，再单击右侧的Add键； 如果有DAD检测器，在完成上述操作后，再选择G2180AA Spectra Evaluation软件，单击右上方的Add键，然后在 New License Number框输 入G2180AA软件登录号，再单击右侧的Add键。选择 需要 安装 的软 件右上方的 Add 键输入 登录 号右侧的 Add 键选择完毕，单击OK。No.323 ?单击Install键进行安装。仪器配置待软件安装完毕进行 仪器配置。 单击OK，确认GPIB 卡类型(旧的通讯方 式，现在很少使用).No.324 ? 选择 Configuration Editor界面中 Configure菜单下Instrument选项， 进入仪器选择界面。 VWD：选Modular LC System； DAD：选Modular 3D LC System。 ? 选择完毕，单击OK。Configuration Editor界面仪器选 择界面No.325 1）对于使用网络(LAN)连接进行通讯的仪器，需要选择LAN通讯方 式，然后单击Add键，在Device Address设置界面选择Identify by IP Address，在IP Address右侧框输入IP地址后，单击OKNo.326 2) 对于使用HP82341c卡进行通讯的仪器，需要选择GPIB通讯方式， 在GPIB Address右侧框输入GPIB地址，然后单击Add键。 ? GPIB地址的选择取决于计算机 与1100哪一个部件连接。例如： 计算机与四元泵连接通讯，则 GPIB地址选择22。有关1100 HPIB地址的详细信息见下表。? 旧的通讯方式，现在很少使用。No.327 3）无论以哪一种方式进行通讯，按1)或2)步骤设置完毕，存贮设置结 果后退出 Configuration Editor界面。 当安装完工作站，第一次启动Instrument 1 Online时，工作站自动 检测哪些部件已经成功地进行通讯。如果通讯成功，在左侧方框中被 检测到的部件图标为绿色。双击左侧方框中所有绿色图标后，绿色图 标移到右侧方框中。至此，工作站地安装彻底完成。左侧 方框右侧 方框No.328 实验二：方法编辑及数据采集?目的：掌握分析参数的设置，方法的编辑、存贮。熟悉一个样品分析 的全过程。?实验条件：?泵：四元泵、二元泵 ?进样器：自动进样器、手动进样器 ?柱温箱：（可选组件） ?检测器：可变波长检测器VWD、二极管阵列检测器DAD ?色谱柱：ODS 0.5um, 100×4.6mm ?流动相比例：A.水15％，B.甲醇85％ ?进样量: 10?L ?柱温：Not control ?检测波长：254nm ?流动相流量：0.5ml/minNo.329 ? 实验步骤? ? ? ? 打开计算机，进入Windows操作系统。 开启1100各部件电源开关。 待1100各部件自检完毕，且通讯成功后，在计算机上启动Online化学工作站 在Method & Run Control界面下，单击Method 菜单，选择菜单中Edit Entire Method…进入Method 编辑状态。No.330 ?单击OK进入Method Information: Instrument 1 编辑界面，在Method Comments下方框中输入对Method 的描述。输入完毕单击OK。?在泵参数设置界面，按要求输入泵参数。设置完毕，单击OK。No.331 ?在自动进样器参数设置界面，选择标准进样方式(Standard Injection) ，并输入进样量。输入完毕，单击OK。（如果没有自动进样器，此 界面不会出现）。?检测器参数设置。?DAD参数设置：输入样品检测波长、样品谱带宽度、参比波 长、 参比谱带宽度及响应时间(PeakWidth)。?VWD参数设置：输入样品检测波长及响应时间(PeakWidth)。No.332 DAD参 数设置 请选中 StoreVWD 参数 设置No.333 ?在柱温箱参数设置界面，选择Not Controlled。然后单击OK。?在Signal Details: Instrument 1编辑界面，单击OK。?在积分参数设置界面，单击OK。?在Specify Report: Instrument 1编辑界面，单击OK。 以上三项均属数据分析参数，在此实验中均不设置。No.334 ?在运行时间表中(Run Time Checklist)编辑界面，选择Data Acquisation 和Standard Data Analysis。参数选择完毕，单击OK，整个分析方法编辑完成。 ?方法存贮。方法编辑完毕，单击Method菜单，选择Save Method As， 输入存盘方法文件名。No.335 ?运行样品?打开Purge阀，进行系统初始化。 ?运行Instrument菜单下System On命令启动系统。(或单击on图标)?待废液管中无气泡流出，降低流量，然后关闭purge阀。No.336 ?单击View菜单，选择Online Signals下Signal Window 1，打开 信号监控窗口。No.337 ?单击信号监控窗口的Change键，进入信号选择窗口，选择所要监 控的信号后，单击Add键，然后单击OK键。No.338 ?待基线稳定之后，单击信号窗口的Balance键，进行基线归零。No.339 ?单击RunControl菜单，选择Sample Info…, 进行样品信息编辑。 注意：样品瓶号不可空缺，否则直接运行空白测试。?进样分析：?对于自动进样器，单击Run Method； ?对于手动进样器，在Load位置注射进样后，扳动手动进样阀至Inject位 置，工作站开始自动采集数据。No.340 实验三 外标法定量?目的：通过使用ESTD1, ESTD3二个数据编辑外标二级校正表，掌握色谱数据的 调用、积分参数的优化、谱图显示的优化，熟悉外标校正曲线编辑的全过程。 ?分析参数： ?样品数据：(浓度单位为ppm) Solvent ESTD1:(标样)--------ESTD3:(标样)--------ESTD5:(未知)--------?样品谱图: C9 9.9 19.8 ? C10 10 20.4 ? C11 10.02 20.6 ?No.341 ?实验步骤： ?一级校正表的建立 ?在Data Analysis界面下，调用低浓度标样数据HPCHEM\1\Data\ESTD1No.342 ?优化谱图显示：打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进 入Signal Option 编辑框，在Range选择选择AutoScale。No.343 ?优化积分 ： ?在Data Analysis界面下，单击Integration菜单，选择Integration Events…， 编 辑积分事件。No.344 ?在积分事件表中，输入合适的积分参数。然后单击积分事件表左上角图标。No.345 ?建立一级校正表：单击Calibration选择New Calibration Table。 ?直接单击OK, 选择 Automatic Setup.No.346 ?在校正表中输入化合物名称及浓度。在输入浓度后，相应化合物的校正曲线会 显示出来。?单击OK键，工作站会提示您是否要删除0浓度行？单击Yes。No.347 ?二级校正表的建立 ?调用第二个标样数据文件HPCHEM\1\DATA\ESTD3 ?按照一级校正表建立中所涉及的内容，优化谱图显示，优化积分参数。?单击Calibration菜单，选择Add Level，编辑二级校正表。No.348 ?在校正表中，输入第二个标样的浓度。输入浓度后，相应化合物的校正曲线会 显示出来。单击OK，完成二级校正表的编辑。No.349 ?校正表参数设定：单击Calibration菜单，选择Calibration Setting,在Calibration Setting编辑框输入浓度单位、时间窗口、 校正曲线类型。No.350 ?报告的设定：单击Report菜单，选择Specify Report，进入Specify Report编辑框 ，输入打印目的地，选择定量方法ESTD。No.351 ?未知样品的定量 ?调用样品数据文件：HPCHEM\1\DATA\ESTD5。 ?优化谱图显示，优化积分参数 。?选择Report菜单下Print Report命令，打印定量结果。存贮分析方法！No.352 External Standard Report============================================ Sorted By : Signal Sunday, October 01, :28Calib. Data Modified : PM Multiplier Dilution : :1.0Signal 1: FID1 A,问题：RetTime Type [min] Area Amt/Area Amount Grp Name [ppm]-------|------|----------|----------|----------|--|------------------1. 如何存贮校正表 及校正曲线？2.317 PV T 1..2.23882 C93.216 PV T 1..3.9.662 PV T 1..3.62065 C11 Totals : 118.805162. 此二级校正曲线 存在什么问题？如 何解决？No.353 实验四 内标法定量?目的：通过使用ISTD1, ISTD5二个数据编辑内标二级校正表，掌握色谱数据的 调用、积分参数的优化、谱图显示的优化，熟悉内标校正曲线编辑的全过程。 ?分析参数： ?样品数据：(浓度单位为ng/ul) Solvent ISTD1:(标样) --------ISTD3:(未知) --------ISTD5:(标样) --------?样品谱图: 内标 C9 9.9 ? 49.8 C10(内标) 10 9.9 10.05 C11 10.02 ? 50.3No.354 ?实验步骤： ?一级校正表的建立 ?在Data Analysis界面下，调用低浓度标样数据HPCHEM\1\Data\ISTD1No.355 ?优化谱图显示：打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进 入Signal Option 编辑框，在Range选择选择AutoScale。No.356 ?优化积分 ： ?在Data Analysis界面下，单击Integration菜单，选择Integration Events…， 编 辑积分事件。No.357 ?在积分事件表中，输入合适的积分参数。然后单击积分事件表左上角图标。No.358 ?建立一级校正表：单击Calibration选择New Calibration Table。 ?直接单击OK, 选择 Automatic Setup.No.359 ?在校正表中输入化合物名称及浓度,并选择C10为内标物。单击OK后，工作站会 提示ISTD的信息，单击OK确认。?单击OK键，工作站会提示您是否要删除0浓度行？单击Yes。No.360 ?二级校正表的建立 ?调用第二个标样数据文件HPCHEM\1\DATA\ISTD5 ?按照一级校正表建立中所涉及的内容，优化谱图显示，优化积分参数。?单击Calibration菜单，选择Add Level，编辑二级校正表。No.361 ?在校正表中，输入第二个标样的浓度。单击OK，完成二级校正表的编辑。No.362 ?校正表参数设定：单击Calibration菜单，选择Calibration Setting,在Calibration Setting编辑框输入浓度单位、时间窗口、样品内标浓度、 校正曲线类型。 样 品 内 标 浓 度 输 入No.363 ?报告的设定：单击Report菜单，选择Specify Report，进入Specify Report编辑框 ，输入打印目的地，选择定量方法ISTD。No.364 ?未知样品的定量 ?调用样品数据文件：HPCHEM\1\DATA\ISTD3。 ?优化谱图显示，优化积分参数 。?选择Report菜单下Print Report命令，打印定量结果。存贮分析方法！No.365 Internal Standard Report=================================================== Sorted By : Signal Calib. Data Modified: Tuesday, October 03, 2000 Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Sample ISTD Information: ISTD ISTD Amount Name # [ng/ul] ----|-------------|------------------------1 9.90000 C10 Signal 1: FID1 A, RetTime [min] Type Area Amt/Area ratio Amount [ng/ul] Grp Name问题：-------|------|----------|----------|----------|--|2.325 PV T 6..00 1.95 9.86 51.2 C113.223 PV T I 2..664 PV T 6.16614e41. 如果一个样品既 做内标定量，又作 外标定量，如何实 施？2.如何选择多个内 标？No.366Totals without ISTD(s) :======================================================== *** End of Report ***
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