为什么分光光度法测定一般选择最大同一物质对不同波长光的吸光度不同为测量同一物质对不同波长光的吸光度不同？

点击联系发帖人 时间：2022-10-10 08:24

同一物质对不同波长光的吸光度不同

摘要本文研究了酸性铬蓝K （ACBK）在pH为10.0的NH3 - NH4Cl介质中与钙和镁同时显色的条件以酸性铬蓝K作显色剂，Ca2+和Mg2+离子均可与ACBK形成1∶1的配合物，在468nm波长处，两种配合物存在一等摩尔吸收点，在此波长及最佳操作条件下，Ca2+和Mg2+的总含量在0～3×10-6 mol·L-1浓度范围内符合比耳定律。并研究了影响该显色反应的各种因素及一些常见共存离子的干扰行为，从而确定出用酸性铬蓝K作显色剂的分光光度法测定水的硬度的最佳实验条件。本法具有灵敏度和准确度较高、操作简便快速等优点，故适合于自来水厂和各化工厂对水的硬度测定。

关键词分光光度法;酸性铬蓝K;水硬度

水質硬度的大小对许多工业部门的生产都有很大的影响。为此，测定水的总硬度是许多工业部门的常规分析[1-2]。目前测定钙和镁总含量的方法通常用EDTA 络合滴定法[3]，这种方法灵敏度较低，且操作麻烦费时。已报道的分光光度法虽有较高的灵敏度，但大都是对水样中钙、镁离子的单一测定或分别测定，应用于水硬度的测定，达不到简便快速的要求。本文采用酸性铬蓝K （ACBK）与钙和镁同时作用的显色体系，应用于水硬度的测定，具有灵敏度高、操作简便快速之优点。

仪器：7230可见分光光度计（宜兴市精科光学仪器有限公司）、紫外可见分光光度计（SPECORD50 德国耶拿公司）、精密酸度计（pHS-3C型上海精密科学仪器有限公司）、电子天平（BS1108S北京赛多利斯天平有限公司）。

试剂：CaCO3（基准试剂天津市河北区海晶精细化工厂）;MgO（沈阳市试剂五厂）;酸性铬蓝K（指示剂北京化工厂）

分别取Ca2+、Mg2+标准溶液或等摩尔的Ca2+、Mg2+混合溶液适量于50mL容量瓶中，加5×10-4 mol·L-1酸性铬蓝K溶液2.00mL，pH=10.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液10mL，用水稀释至刻度，摇匀，静置5min后，用1cm比色皿于在波长468nm处以试剂空白为参比，测量吸光度。

按上述试验方法利用紫外扫描分别绘制了钙、镁有色配合物（浓度均为5×10-5mol·L-1）的吸收光谱，结果见图1。由图1可知，Ca-ACBK的最大吸收波长分别在510nm和540nm处，Mg-ACBK的最大吸收波长为511nm和543nm，而两种配合物光谱曲线的交点在468nm处，以下试验均采用468nm波长（即Ca、Mg的等摩尔吸收波长）进行。

在Ca2+、Mg2+等摩尔浓度混合溶液中，分别加入pH值不同的NH3-NH4Cl缓冲溶液（pH9.0～10.6）进行显色试验，发现吸光度随pH增大而增大，但在pH9.9～10.2范围内吸光度基本保持稳定，因此本实验选用pH=10.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。

经试验，缓冲溶液用量在8.5mL以上时，有足够的缓冲能力将整个显色体系的pH值维持在10.0，本实验选10mL。

在Ca2+、Mg2+等摩尔浓度混合溶液六份，分别加入显色剂酸性铬蓝K用量在1.00，1.50，2.00，2.50，2.80，3.00mL的光度，以吸光度为纵坐标，显色剂用量为横坐标绘制曲线，找出吸光度最大且恒定的显色剂体积作为显色剂最佳用量。

3.5 共存离子的影响

将Ca2+与Mg2+离子等摩尔混合浓度（5×10-5 mol·L-1），分别取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于25mL容量瓶中，按实验方法测定数据绘制标准曲线。结果表明，二者显色后在0～3×10-6 mol·L-1浓度范围内符合朗伯比耳定律，从而得出一元线性回归方程。

取Ca2+、Mg2+混合标准溶液显色浓度为5×10-4 mol·L-1的样液进行7 次平行测定，求得相对标准偏差为0.83%。对水样进行测定，并分别加入Ca2+、Mg2+混合标准溶液测定回收率。实验结果表明本方法具有较高灵敏度和准确度、操作简便快速等优点，故适合于自来水厂和各化工厂对水的硬度测定。

[1] 北京大学化学系分析化学教学组.基础分析化学实验（第二版）[M].北京：北京大学出版社，1998：176-179.

[2] 张孙玮，吴水生，刘绍璞.有机试剂在分析化学中的应用[M].北京：科学出版社，1981：204-207.

[3] 武汉大学主编.分析化学实验[M].北京：离等教育出版社，1994：142.

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紫外可见分光光度计法测铅

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紫外可见分光光度计对于分析人员来说是zui有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。朗伯一比耳定律( Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l（吸收光程）的函数。其常用表达式为：A=∈×l×C （式中，∈为系数）紫外可见分光光度计广泛应用于冶金、机械、化工、医疗卫生、临床检验、生物化学、环境保护、食品、材料科学等领域的生产、教学和科研工作中，特别适合对各种物质进行定量及定性分析。

铅是一种具有蓄积性的元素，铅污染直接来源于饮用水、蔬菜、粮食、水果、肉类与畜产品，间接来源于食品的生产、包装、运输等过程。铅危害主要表现为以下几个方面：影响脑、肾、神经系统和血红细胞等的功能；影响婴幼儿的生长和智力发育，损伤认知功能、神经行为和学习记忆能力等，严重者造成痴呆。因此，对铅的有效检测一直备受关注。本文采用紫外可见分光光度计法测定微量铅含量，通过正交实验研究了缓冲溶液PH值、显色剂二甲酚橙（XO）用量、表面活性剂氯代十六烷基吡啶（CPC）用量对铅含量测定的影响。

UV1902型双光束紫可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）

以二溴羟基苯基卟啉为显色剂，配合物zui大吸收波长为479nm，在*实验条件下绘制标准曲线，在0.06~1.00mg/ml范围内呈线性相关，线性回归方程为y=0.894x-0.022，相关系数为0.9994，摩尔吸光系数ε=2.8×105L·mol-1·cm-1，方法检出限为0.02ug/ml。

双光束双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。它与传统分光光度法的不同之处，在于它采用了两个不同的波长即测量波长和参比波长同时测定一个样品溶液，以克服单波长测定的缺点，提高了测定结果的精密度和准确度。

UV1902型双光束紫可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）

UV1901(PC)/UV1902(PC)是一台双光束扫描型紫外可见分光光度计。它具有较宽的光谱范围和优良的品质。由于仪器内藏式微处理机系统的强大作用，加上优良的光学、电路系统和合理的机械结构，并采用大屏幕液晶显示，将为各行业实验室的分析测试工作提供十分有效而直观的手段。

UV1901(PC)/UV1902(PC)紫外/可见分光光度计采用中文人机对话的操作方式，简便易学。大屏幕液晶显示屏上的菜单对每一个对应的操作步骤进行选择和认可，即能完成你所需的功能。该仪器灯源的更换一改过去国产仪器繁琐的方法，整个灯源的更换操作，用户只需旋动几个螺丝即可完成，无需进行繁琐的对光调整即能保证灯源处于*位置。

仪器的软件程序设计具有自动保护功能，确保仪器在万一操作失误时仍能及时恢复正常工作。

作为一种的实用型紫外/可见分光光度计，UV1901(PC)/UV1902(PC)紫外/可见分光光度计快速简捷的分析方法广泛应用于有机、无机、石油、制药、环境、生物化学、医学、食品等部门，是常规质量控制（QC）和质量分析（QA）zui主要的仪器之一。

1）开机仪器内部系统工作状态自检及自动校正波长

2）波长变换自动定位

5）自动选择光源的*切换点

6）图谱、数据显示打印

7）显示各种出错信息

2）单波长定量分析（含多阶回归浓度参数测定）

3）二波长、三波长定量分析（含多阶回归浓度参数测定）

7）曲线的组合及运算，曲线多阶微分平滑，图谱缩放，曲线保存调用。

8）峰值标定、搜索、打印输出

在主菜单中选中该项后,按[ENTER]键即可进入此功能块。

按[←][↑][→][↓]键到达你所需设定的行,对每一修正行,如输入数值有错,请按[CE]键清除后,重新输入正确数值即可。

如输入数据不在可选择范围内,屏幕提示:输入错误此时输入正确数值即可.

1）测量模式：分为两种，即透射比（T%）、吸光度（ABS）

本模式没有[E]测量方式。（本例为透射比）

2）测量波长数：对测量波长个数的设定，程序设定为（1～6）个点。

设定完成后，屏幕提示：请输入波长····

此时请依次输入波长的具体值。

所有波长值输入完成后（本例为440nm、546nm、635nm三点），用一对配套石英比色皿倒入参比样品，分别放入参比光路和样品光路（本例参比为空气），然后按下[F1]键即[多点校正]。

仪器自动依次对每个波长点0%(暗电流)及100%(满度)进行调整,自调结束屏幕提示消失后.取出样品光路中的比色皿,重新倒入待测样品并放回样品光路(本例待测样品为10%滤光片)，按[START/STOP]键,此时仪器自动依次测出样品在每个波长点的测量值。

重复按[START/STOP]键可以进行多个样品的测量.

每个样品测量完成后,按[F4]键对所测得数据进行打印输出.

由于铅离子与XO形成金属配合物后会使其紫外吸收峰红移，且吸收强度有较大的增强，从而具有很好的显色效果。

影响铅含量测定的主要因素是缓冲溶液PH值、XO用量、CPC用量。因此，本实验选择缓冲溶液PH值、XO用量、CPC用量3个因素进行3因素5水平的正交实验，优化测定条件。

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3. 趋肤效应 5. 光栅闪耀特性 6. 最后线 6. 偶合常数

7.梯度淋洗 8. 反相色谱 9. 亚稳离子峰10.光谱通带11.共振线12.分析线

2.正相色谱14.离子对色谱15 离子抑制色谱16.程序升温17。增色和减色效应

3.18.离子选择性电极19.多普勒效应20.离子选择性电极21.摩尔吸光系数22发色团23.非红外活性振动2

7.激发电位和离子电位

28.原子线和离子线29.半波电位30.支持电解质31.极谱波32.极限扩散电流

33.谱线的自吸34.黑度35.光谱通带

1.紫外可见光度分析中极性溶剂会使被测物吸收峰( )

A. 消失 B 精细结构更明显

2.按一般光度法用空白溶液作参比溶液，测得某试液的透射比为10%，如果更改参比溶液，用一般分光光度法测得透射比为20% 的标准溶液作参比溶液，则试液的透光率应等于(

3.许多化合物的吸收曲线表明，它们的最大吸收常常位于200─400nm 之间，对这一光谱区

4.助色团对谱带的影响是使谱带( )

5.指出下列哪种因素对朗伯-比尔定律不产生偏差？( )

C 溶液的折射指数增加

6.在310nm时, 如果溶液的百分透射比是90%,在这一波长时的吸收值是( )

7.紫外-可见吸收光谱主要决定于( )

A 分子的振动、转动能级的跃迁

D 原子的外层电子能级间跃迁

6.原子吸收分析对光源进行调制, 主要是为了消除( )

B 原子化器火焰的干扰

7.影响原子吸收线宽度的最主要因素是( )

8.在原子吸收法中, 能够导致谱线峰值产生位移和轮廓不对称的变宽应是( )

9非火焰原子吸收光谱法的主要优点是什么?

A 检出限低；B。取样量小；C。物理干扰小；D。可用于真空紫外区。

10根据范氏理论，想要提高柱效，则那种措施不利( )

D 尽可能采用高流速11关于气相色谱温度的选择，错误的是( )

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