吕乐琪抗坏血酸的性质及国标测定方法简介目录抗坏血酸的性质及国标测定方法简介1一、CNS_/bbsfiles/images/786__/bbsfiles/images/597__/bbsfiles/images/873__/bbsfiles/images/996_618_.png5.试样溶液的测定对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)-抗坏血酸的浓度(μg/mL)。6.空白试验空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。3.2.4结果计算试样中L(+)-抗坏血酸的含量和L(+)-抗坏血酸总量以毫克每百克表示,X-试样中L(+)-抗坏血酸的含量,单位为毫克每百克(mg/100g)
C1-样液中L(+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL) .Co-样品空白液中L(+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL) V-试样的最后定容体积,单位为毫升(mL) m-实际检测试样质量,单位克(g) 1000-换算系数(由μg/mL换算成mg/mL的换算因子 F-稀释倍数(若使用6.3还原步骤时,即为2.5)
K-若使用6.3中甲醇沉淀步骤时,即为1.25 100-换算系数(由mg/g换算成mg/100g的换算因子。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。3.2.5特点(1) 高压。在高效液相色谱系统当中,泵的输出高压能够为载液的流动提供动力,不仅能够有效提升载液的流动速度,而且能够有效提升分离速度。(2)
高速。由于高效液相色谱系统采用了高压输送的方式,使得溶质检测的速率得到了大幅度的提升。通常情况下,样品的检测可以在数十分钟之内即可完成,有些样品甚至只需要短短的几分钟即可完成检测。高效液相色谱法的高速特点是其他分离技术所达不到的,这是高效液相色谱法最为突出的优点之一。(3)
高效。高效液相色谱法的高效特点是指其具有较高的分离效能。高效液相色谱法利用不同溶质在不内向与流动相之间分配不同来实现溶质的分离,且同时可以对多种溶质进行分离。与此同时,其在分离效果上也有着十分优异的表现,甚至能超过工业精馏塔的分离效能。(4) 高灵敏度。高效液相色谱系统的检测器精度可以达到0.01ng。(5)
应用范围广。高效液压色谱法可以满足绝大多数有机化合物的分离与分析。除此之外,高效液相色谱法还具有分析选择灵活的特点。对于不同溶质的检测,通过选择合适的流动相,可以使得溶质的分离速度与效果更加良好。(6)
适用于乳粉、谷物、蔬菜、水果及其制品、肉制品、维生素类补充剂、果冻、胶基糖果、八宝粥、葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸、D(-)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定3.3荧光法测抗坏血酸含量3.3.1原理维生素C自身没有荧光,维生素C先被活性炭(Norit)氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA),DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物,再与邻苯二胺(OPDA)反应产生具有荧光的喹喔啉,其荧光强度与维生素C的浓度在一定范围内呈线性关系,以此测定试样中L(+)-抗坏血酸总量。3.3.2仪器与试剂1.
荧光分光光度计:具有激发波长338nm及发射波长420nm。配有1cm比色皿。3.3.3实验步骤1.样品的制备称取约100g(精确至0.1g)试样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂测试匀浆的酸碱度。如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸溶液稀释
若呈黄色或蓝色,则称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸硫酸溶液稀释,使其pH为1.2。匀浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量而定。当试样液中抗坏血酸含量在40pg/mL~100μg/mL之间,一般称取20g(精确至0.01g)匀浆,用相应溶液稀释至100mL,过滤,滤液备用。2.
样品的测定2.1氧化处理分别准确吸取50mL试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200mL具塞锥形瓶中,加入2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和标准氧化液,待测定。分别准确吸取10mL试样氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“试样液”和“试样空白液”。分别准确吸取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“标准液”和“标准空白液”。于“试样空白液”和“标准空白液”中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至100mL,在4C冰箱中放置2h~3h,取出待测。于“试样液”和“标准液”中各加5mL的500g/L乙酸钠溶液,用水稀释至100mL,待测。2.2标准曲线的制备准确吸取上述“标准液”0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,分别置于10mL具塞刻度试管中,用水补充至2.0mL。另准确吸取“标准空白液”2mL于10mL带盖刻度试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发波长338nm、发射波长420nm处测定荧光强度。以“标准液”系列荧光强度分别减去“标准空白液”荧光强度的差值为纵坐标,对应的L(+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程。2.3试样测定分别准确吸取2mL“试样液”和“试样空白液”于10mL具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发波长338nm、发射波长420nm处测定荧光强度。以“试样液”荧光强度减去“试样空白液”的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计算测定试样溶液中L(+)-抗坏血酸总量。3.3.4结果计算试样中L(+)-抗坏血酸总量,结果以毫克每百克表示:X一试样中L(+)-抗坏血酸的总量,单位为毫克每百克(mg/100g)
c一由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L(+)抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL) V一荧光反应所用试样体积,单位为毫升(mL) m一实际检测试样质量,单位克(g) F一试样溶液的稀释倍数 100一换算系数
1000一换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。3.3.5特点荧光分析是一种先进的分析方法,它比电子探针法、质谱法、光谱法、极谱法等都应用的较广泛和普及,这同荧光分析具有很多优点分不开的。(1)
荧光分析所用的设备较简单,如目测荧光仪和荧光光度计构造非常简单完全可以自己制造。比起质谱仪、极谱仪和电子探针仪来它在造价上要便宜很多倍(2)
荧光分析的最大特点是:分析灵敏度高、选择性强和使用简便。同时具备这三大特点的仪器并不多。在紫外线照射下能直接发射荧光的化学元素并不很多,所以对一些元素进行荧光分析时大部分采用间接测定法,这就是用有机试剂与被测定的元素组成络合物。这些络合物在紫外线照射下能发射出不同波长的荧光素,然后由荧光强度测定出该元素的含量。由于有机荧光试剂的品种繁多,用荧光分析可测定的元素有六十多种。(3)
适用于乳粉、蔬菜、水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定4、 参考文献1. 翟中和,王喜忠,丁明孝.细胞生物学第四版.北京:高等教育出版社,2011:3742. 王放.食品营养保健原理与技术:中国轻工业出版社,19963. 邹纯才.“十三五”规划教材药物分析第2版:江苏科学技术出版社,2018.02:173-1744.
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