（1）准备　将灭菌锅放在2000瓦電炉上或放在有足够火力的煤气灶、煤炉上，向锅内加水至水位标记线为止将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅內套层中物品放置不宜过多，过挤锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，关闭锅盖上的气阀

　　（2）加热　点燃热源，开始加热当锅盖上的压力表达到0.5千克/厘米2时，打开放气阀排净锅内冷空气，直到压力表回降到“0”时關闭气阀，继续加热当压力表上升到所需压力时（一般为1千克/厘米2），开始计算灭菌时间此时应适当关小热源，不断调节热源大小使压力始终维持在所需数值上，达到保压时间后停止加热，使灭菌锅内压力自然下降

　　（3）结束　待压力表降至“0”时，拧松螺旋半开锅盖，用锅内余热烘干盖纸10分钟后取出灭菌物品。

　　（4）注意事项　在灭菌过程中应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、医学教.育网搜集整理两个大气压的过热蒸汽操作时，必须严格按照操作规程操作否则容易发生意外事故。