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江莱生物解答：一个孔上样量10-50微升。elisa试剂盒用户：13个elisa试剂盒要做多久？江莱生物解答：看你做多少个样本，你买的规格是哪种，一般96t的盒子做85个样，48t做37个样。elisa试剂盒用户：买同一个指标的几个盒子，用不用都做标准曲线？
江莱生物解答：如果同一个指标买了4个，建议每盒都做个标曲。同一个盒子，即使分几次用，做一个标曲也行了，因为数值不会偏差太大。elisa试剂盒用户：收集血清的时候用什么管？
江莱生物解答：普通离心管就可以。elisa试剂盒用户：elisa方法的不测人血小板第四因子里igg抗体的滴度吗？
江莱生物解答：elisa不测滴度的，荧光法可以测。elisa试剂盒用户：elisa试剂盒只能用于纯研究是什么意思？江莱生物解答：elisa试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 检测原理 ： 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。elisa试剂盒用户：那我们算出来的ach含量为什么出现负值？
江莱生物解答：说明个别样本的浓度很低，当浓度接近第6个点的时候，直线方程就有可能计算出负值。elisa试剂盒用户：进口elisa试剂盒好还是国产elisa试剂盒好？江莱生物解答：都好 看自己实验经费决定了 充足呢 就用进口elisa试剂盒
不充足呢就用国产elisa试剂盒。elisa试剂盒用户：标准的检测85个样本和单孔相比，有什么好的地方？
江莱生物解答：标准的检测又叫复孔检测，标准的检验重复性测的结果好，大家都叫复孔是标准的检测。elisa试剂盒用户：elisa试剂盒检测范围什么意思？ 江莱生物解答：比如试剂盒检测蛋白质的浓度范围是10--100nmol/ml,而你的三个样品浓度为100，200，和300.那么你检测到的数值是一样的，都是试剂盒检测的最大值100。
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中枢免疫器官
中枢免疫器官又称一级免疫器官，主要包括骨髓和胸腺。是免疫细胞发生、发育、分化与成熟的场所；同时对外周免疫器官的发育亦起主导作用。
中枢免疫器官包括、
中枢免疫器官骨髓
重要的造血及免疫器官。血液的所有细胞成分都来源于，其中髓系细胞（、粒细胞系、系与-血小板系）是完全在骨髓内分化生成的；细胞（T细胞与）的发育前期是在骨髓内完成；另外B细胞分化为后，也回到骨髓，并在这里大量产生抗体。
骨髓是，也是各种免疫细胞的发源地，具有分泌造血细胞及生长和分化调节的作用。骨髓中各阶段细胞不断在完成更新、增殖、分化和成熟等发育过程。其原始阶段细胞为（stem cell），可以形成红细胞、粒细胞、等，以及和。这些过程需要不同类型的（cytokine）的调节。如白细胞介素、（GM—CSF）等。原始粒细胞分化成熟的过程中，白细胞介素起着重要作用。当骨髓功能缺陷时，可导致和均缺陷，如因或放疗引起的功能异常时，需根据情况，使免疫功能重建。
中枢免疫器官胸腺
正常胸腺的结构，是发生最早的免疫器官。新生期胸腺约重15~20g，至青春期可达30~40g。胸腺有包被；胸腺由外层皮质、内层组成；表面的结缔组织伸入胸腺成为胸腺隔，形成许多不完全分隔的小叶；外层皮质主要由（）和上皮密集构成。
对机体免疫功能的建立，以及丧失免疫功能的重建均具有很重要作用，也是分化成熟的场所。骨髓产生的部分在胸腺中继续发育成熟为T细胞，能分泌，在促进T细胞分化和成熟过程中，选择性发挥作用。T辅助细胞（TH）和T（TS）均在胸腺中形成。胸腺也是机体维持的器官。[1]
曹泽毅．中华妇产科学．北京：人民卫生出版社，2008年：1817|/|/|/|/|/|
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【求助】开题用，细胞因子的研究有何种方法？生物芯片可以吗？
本人想做细胞因子的研究，但就技术而言，我一直定不下来用那种。我听人说过，芯片已经有成形的监测细胞因子的技术。但很苦恼，我一直没有查到相关的资料，大致需要多少经费。谢谢大虾的解囊相助。目前对细胞因子的研究主要从3个方面:1是从生物活性方面.比如通过特定细胞因子(CK)体外刺激特定细胞生长来进行鉴定.2是免疫学方法研究.目前常用的有ELISA,FACS,ELISPOT等,其灵敏度及应用特点各有所不同.另外已经出现了可以同时检测多个CK的chip,可以进行高通量的研究.一些生物公司有代理,可以到其网站上查询资料.3是基因水平的研究.比如定量的RT-PCR目前应用较广.对CK 从其基因水平来反映表达情况.
（缩略图，点击图片链接看原图）请大家继续追贴参加讨论。我愿处处充满阳光：不好意思，这个图我看不大清楚，能给我个pdf 格式的吗？已经出现了可以同时检测多个CK的chip,可以进行高通量的研究.一些生物公司有代理,可以到其网站上查询资料。请明示具体那些公司好吗？顺便提下我的课题，我研究的是一种病原体（立克次体）介于细菌和病毒之间，为原核生物。我现在想研究人患了该病后，体内细胞因子有何改变？做病例对照研究。你认为做怎样的细胞因子研究较好。 多谢！另外，该病原体我提的核酸是DNAliping98343 wrote:我愿处处充满阳光：不好意思，这个图我看不大清楚，能给我个pdf 格式的吗？已经出现了可以同时检测多个CK的chip,可以进行高通量的研究.一些生物公司有代理,可以到其网站上查询资料。请明示具体那些公司好吗？顺便提下我的课题，我研究的是一种病原体（立克次体）介于细菌和病毒之间，为原核生物。我现在想研究人患了该病后，体内细胞因子有何改变？做病例对照研究。你认为做怎样的细胞因子研究较好。 多谢！你好,图的问题可以这样解决:你先把图保存下来,然后用ACDSee等看图软件打开后,把图放大,里面的内容就可以看的很清楚.或者直接在图上面点鼠标左键,图片可以在新窗口中打开,你也可以看的比较清楚.关于我提到的高通量chip,你可以到晶美公司的网站上查到比较详细的信息.另外比较大的生物公司一般都会有相关的产品,相信你对这些公司应该比较熟悉,多到它们的网站上看看,你会找到需要的信息.关于细胞因子的问题,我觉得你应该先看一下这方面的文献,明确思路,同时选择合适的细胞因子进行检测.我不做立克次体,所以对它引起的细胞因子改变并不熟悉,这点还是要通过你自己解决.若是单一某个细胞因子,若有条件,用RT-PCR或FACS都可以;若是多个,chip可以考虑,毕竟是高通量,效率比较高.liping98343 wrote:另外，该病原体我提的核酸是DNA你好,我不太明白你说这句话的意思.检测CK,不论是ELISA,FACS或是CHIP,一般都是取感染的动物或人的外周血进行检测.你如果打算做RT-PCR,那么应该从被感染的机体的外周血中提取RNA进行后续实验.我愿处处充满阳光：谢谢。好感动哦上传细胞因子实验方法--cytokine bioactivity methods一书，希望有所帮助。
（缩略图，点击图片链接看原图）此处下载>请大家继续跟贴讨论细胞因子研究的新方法,新进展.我个人认为CK的研究尤其对免疫学领域的科研是非常重要的.大家都知道,机体的免疫网络是一个庞大的,复杂的,环环相关的系统,各种CKs参与,涉及多种信号途径.每一个CK都相当于免疫网络的中继站,相互连系,发挥特定功能,从而维持免疫网络的动态平衡.而某些CKs在网络中更是发挥着核心作用.我个人认为,若是把免疫网络的各个脉络都摸清楚了,绘制一个详细的CKs Map,其意义不啻于HGP的基因组图.并且可以为进一步阐明CKs之间,CKs与免疫细胞之间,CKs与机体的immune response之间的具体作用关系打下基础.当然这肯定是一个庞大的工程,需要各方面,各领域的相互协作.以上是我的一些拙见,欢迎大家一起讨论.提供一篇关于免疫网络的短文章,和大家共飨.免疫网络 　　免疫系统在起作用时作为一个整体,而无一个成分自主地起着作用.在任何的免疫应答时这些成分相互协调地,前后地或相抑制地起着功能.此见解可通过免疫系统清除微生物的能力得以证实.细胞外的微生物(大多数有荚膜的细菌)仅在被吞噬后才被消化.细胞内微生物(如分枝杆菌)容易被吞噬,但不会被消化,仅当巨噬细胞接受了一种激活信号后才将它们消化.　　因而排除胞外微生物的策略是直接针对吞噬作用.调理作用(用抗体或补体产物包裹微生物)有利于此作用.由于大多数吞噬细胞具有抗体Fc部分和C3产物的受体,在细菌表面所存在的这些分子有利于细菌的粘附和吞噬.这种"简单"的免疫应答取决于抗体成功的合成,补体连锁的激活和完整的吞噬系统.抗体由B细胞产生,然而T细胞可辅助和抑制B细胞.再则,吞噬细胞可由趋化因子的作用得到补充,这些趋化因子中的一部分由T细胞所产生.　　清除受感染吞噬细胞内的一些微生物的策略涉及到宿主细胞的激活,然后被"武装",以非特异性方式杀死这些微生物.使巨噬细胞激活的能力是经典迟发型超敏反应(DTH)的核心.DTH皮试是免疫应答最好的一种范例,各种不同的连锁反应参与此应答.DTH皮试时将一种抗原皮下注射于过去曾接触此抗原的病人,在48小时内局部产生硬结.从图146-2表明错综复杂的网络参与这一应答.在皮肤的朗格汉斯细胞摄取注入的抗原,处理并将它(与MHCⅡ类抗原组成复合物)提呈给CD4细胞.此细胞(即一种长寿命记忆细胞)以前曾接触过此抗原.一旦CD4+ 细胞与抗原-MHC复合物相结合,它就表达IL-2受体,并释放几种细胞因子(如IFN-γ,IL-2和淋巴细胞,巨噬细胞趋化因子).IFN-γ诱导内皮细胞使它们增加表达粘附分子,因而有利于淋巴细胞和巨噬细胞通过内皮屏障.IL-2和IFN-γ也能作为增殖/分化的信号,使记忆T细胞克隆和使新近到达注射部位的T细胞扩增.当巨噬细胞到达该处,它们可由于激活的T细胞所分泌的巨噬细胞移动抑制因子的作用防止再离开.IFN-γ和GM-CSF二者均由T细胞分泌,可作为巨噬细胞的激活因子(MAF),这种激活的巨噬细胞被"武装"起来能杀死胞内的微生物和旁立的肿瘤细胞.　　激活的巨噬细胞所分泌的IL-1和TFN-α可潜在地使IFN-γ和GM-CSF分泌,增加内皮细胞上粘附分子的表达,并使这些细胞分泌组织因子,从而启动凝血连锁反应,最终使纤维蛋白沉着.同时激活的淋巴细胞分泌巨噬细胞前凝血剂诱导因子(MPIF),促使激活的巨噬细胞表达巨噬细胞前凝血剂活性(MPCA)；MP-CA也能激活凝血的连锁反应,引起纤维蛋白沉着.继而引起DTH皮试所见到的硬结　　DTH途径在清除吞噬感染细胞的微生物中起着重要作用.某些微生物(如病毒)可感染缺少溶解机构的细胞,因不能使细胞激活而不能杀死胞内的微生物.此种致病原可被CTL清除.病毒感染时,在感染细胞的表面表达病毒抗原并与MHC相结合.这种病毒-MHC复合物将刺激自体CTL的产生,然后杀死表达此种复合物的细胞.根据病毒产物与MHCⅠ类或Ⅱ类的结合,CTL将可分为CD8和CD4亚类.如上面所讨论,与不同MHC种类的结合取决于抗原提呈途径,如麻疹和单纯疱疹病毒所产生的CTL属CD4亚类.在流感病毒感染时针对核蛋白抗原的CTL为CD8,而针对血凝素抗原的是CD4.
免疫网络.doc (26.0k)谢谢martin4720主任的编辑修改!细胞因子研究的方法确实有很多种：BD pharmingen公司的CBA技术，利用了流式检测的技术特点同时进行多种细胞细胞因子的定性和定量，针对单个样本（&50ul）可以得到多达72个目的蛋白的数据。另外，还可以根据研究目的和兴趣选择不同的细胞因子组合方案。目前该技术应用广泛，特别是整体免疫功能的监测，药物作用后，机体或者细胞模型的细胞因子变化水平。此外还有Qiangen公司的liquichip等等。softsalt wrote:细胞因子研究的方法确实有很多种：BD pharmingen公司的CBA技术，利用了流式检测的技术特点同时进行多种细胞细胞因子的定性和定量，针对单个样本（&50ul）可以得到多达72个目的蛋白的数据。另外，还可以根据研究目的和兴趣选择不同的细胞因子组合方案。目前该技术应用广泛，特别是整体免疫功能的监测，药物作用后，机体或者细胞模型的细胞因子变化水平。此外还有Qiangen公司的liquichip等等。请问您用过BD的CBA Kit吗?我打算用.跟您了解一下.谢谢Softsalt say: 我用过BD CBA Kit，有什么问题请发Email给我，,最近比较忙，上来次数很少。红红的苹果 wrote:此处下载>不能下载呢，能发一份给我吗？或者给我个链接下载也行！我的邮箱：wuhua.(#代替的是＠哟，防恶意软件发垃圾信）谢谢呢！RISC wrote:请问您用过BD的CBA Kit吗?我打算用.跟您了解一下.谢谢RISC:关于CBA的问题，您尽管问。如果softsalt 没有时间回答你，我回答你。shanghainese wrote:RISC:关于CBA的问题，您尽管问。如果softsalt 没有时间回答你，我回答你。谢谢。我要检测免疫小鼠体内细胞因子的变化，至少要检测IL-4，IFN-r，IL-12，CD80，CD83，CD85等。希望能实现高通量的检测。问过代理公司，目前CBA只能同时检测6种CKs，而且我要检测的CD80，CD83，CD85等不包括。但同时还提到可以自由选择要检测的CKs，根据要求组成新的KIT。您能详细介绍一下CBA吗，我在网上查到的资料比较泛泛。或者能否提供一些具体资料，使我能对其优点，局限，应用范围及可重复性准确性等能更具体的掌握。谢谢！首先用CBA要有流式细胞仪。旧的CBA只能同时检测6种CKs，现在新出来的 CBA Flex Set 可以比较自由的组合/选则所要的试剂盒，可以同时测出十多，二十个CKs。新出来的 CBA Flex Set 最好用在BD新型的流式细胞仪FACSArray上。目前BD还没有CD80，CD83，CD85等的 CBA 试剂盒。1.
CBA的特点是微量，极少量标本就能测出多项指标。2.
CBA是省时间。操作简单。3.
灵敏度高。结果精确。重复性好。只要加 50 微升样本，50 微升 Capture Bead, 50 微升 Detection Reagent.室温孵育2小时（人3小时），就可以上机测样本了。shanghainese wrote:首先用CBA要有流式细胞仪。旧的CBA只能同时检测6种CKs，现在新出来的 CBA Flex Set 可以比较自由的组合/选则所要的试剂盒，可以同时测出十多，二十个CKs。新出来的 CBA Flex Set 最好用在BD新型的流式细胞仪FACSArray上。目前BD还没有CD80，CD83，CD85等的 CBA 试剂盒。1.
CBA的特点是微量，极少量标本就能测出多项指标。2.
CBA是省时间。操作简单。3.
灵敏度高。结果精确。重复性好。只要加 50 微升样本，50 微升 Capture Bead, 50 微升 Detection Reagent.室温孵育2小时（人3小时），就可以上机测样本了。谢谢！新的CBA Flex Set必须要用BD新型的流式细胞仪FACSArray吗？我现在没有条件也不可能去重新购置新型的流式设备。请问会有很大影响吗，影响在什么地方？CD80，CD83，CD85专门的检测抗体有没有？您有电子版的CBA说明吗？能否赠送我一份。谢谢！新的CBA Flex Set最好用BD新型的流式细胞仪FACSArray。 FACSCalibur 或其它流式细胞仪也行，具体说明请到BD Biosciences 的网站上去查查。
里面不仅有电子版的CBA说明，还有您所需的抗体。祝好运！我决定要用液相芯片来研究了我的课题也是关于一种细胞因子，看到有“cytokine bioactivity methods”真是太好了，可是试了几次都下载不到，可否发到我的邮箱里： 非常感谢！谁能传一些ELISPORT的资料，谢谢两篇关于ELISPOT的文献，有兴趣的看一看：J. Immunol. 2-1872J. Immunol. 3-1361我个人并不主张太fancy的研究手段，象这样的课题一般也就是ELISA就可以了，没有必要高通量，新方法。一个课题的关键在于设计是否严谨，结构是否逻辑紧密，至于方法学上体内细胞因子和趋化因子常规上在感染免疫和细胞免疫基本都是用ELISA，一则它直接反映蛋白水平的变化，基因芯片做不到，成本较低，加上操作比较简单，也有大量的其他文献数据参考，如果是我的话，一定是ELISA了，不会追求芯片技术。drzhouhong wrote:我个人并不主张太fancy的研究手段，象这样的课题一般也就是ELISA就可以了，没有必要高通量，新方法。一个课题的关键在于设计是否严谨，结构是否逻辑紧密，至于方法学上体内细胞因子和趋化因子常规上在感染免疫和细胞免疫基本都是用ELISA，一则它直接反映蛋白水平的变化，基因芯片做不到，成本较低，加上操作比较简单，也有大量的其他文献数据参考，如果是我的话，一定是ELISA了，不会追求芯片技术。您说的不错。但是当您的标本量少，而且要测多个指标时，ELISA就受到了限制。CBA就可以解决这个问题。“cytokine bioactivity methods”真是个好东西!我做的课题和细胞因子有关系,所以很感兴趣!不过好象下载不了了!可以劳驾您发我的邮箱里吗?先谢过啦!"cytokine bioactivity methods"我也感兴趣，可以给我发一下吗？liping.细胞因子的检测方法一般分为免疫学,生物学及分子生物学测定三大类.
(一) 免疫学检测法
免疫学检测法的基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测.如免疫斑点法,ELISA法,和免疫印迹法等.
(二) 生物学测定法
生物学测定法的原理是根据细胞因子依赖性细胞株(即靶细胞)的促增长作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位.本发是使用最早的最普遍的方法,此法需培养特定的靶细胞株或依赖株,手段繁琐,检测费时.
(三) 分子生物学测定法
此法是近几年来引用的新技术,已问世的方法有RNA印迹法,核酸酶保护分析,原位杂交和PCR.其原理都是通过检测相应mRNA量来推算细胞因子的有无或多少.红红的苹果 wrote:上传细胞因子实验方法--cytokine bioactivity methods一书，希望有所帮助。我的课题也是关于一种细胞因子， 可否将“cytokine bioactivity methods”发到我的邮箱里：xzhou@非常感谢！drzhouhong wrote:我个人并不主张太fancy的研究手段，象这样的课题一般也就是ELISA就可以了，没有必要高通量，新方法。一个课题的关键在于设计是否严谨，结构是否逻辑紧密，至于方法学上体内细胞因子和趋化因子常规上在感染免疫和细胞免疫基本都是用ELISA，一则它直接反映蛋白水平的变化，基因芯片做不到，成本较低，加上操作比较简单，也有大量的其他文献数据参考，如果是我的话，一定是ELISA了，不会追求芯片技术。我同意你的观点。1 可能楼主的意思是要证实这种立克茨体感染后，有那些细胞因子变化了以及是如何变化了，如果要是这样的话，采用ELISA的方法就不行了，第一没有办法做多，就10个ELISA盒子也不会出来楼主所要的结果，而且这样需要的标本量大，而病例数又不多，浪费是必然的。2 用蛋白芯片做的方法是不错，但其效果如何需要楼主多思考。3 采用蛋白组学方法，用2DE加质谱可能会更好一些，高科技的东西我也不太懂，只是看到有书上这么说。希望你的研究进展顺利！其实测细胞因子液相芯片的技术已经很成熟了，并且这方面的文章也发了不少了。luminex公司有这方面的试剂盒，省时 省力。一次性的完成你所测的项目，并且能避免接触ELISA方法的有毒物质。就我个人而言我觉得你用luminex可以很好的解决你的问题，而且能使灵敏度和特异度有很大的提高。我现在正在用luminex100做研究，有机会我们可以一起探讨我曾经用ELISA的方法测过白介素1、2、6，但是结果所得的值非常低，想请问各位朋友，是什么原因？还有，标准曲线中所显示的比较低的值是在13.5pg/ml，那如果我所得的值很低，怎么在曲线上求出我要的值？恳请各位大师相救，我真的很郁闷，我的邮箱，多谢了，感激不尽！
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